Ифа в диагностике хламидиоза

Анализы на хламидии

Диагноз «хламидиоз» нельзя поставить только по симптомам. Точно определить эту болезнь помогают лабораторные анализы. Почти каждая лаборатория предлагает несколько анализов на хламидиоз. Но как не запутаться в многочисленных методах и точно определить хламидиоз? Рассказываем про каждый из них и разбираемся, в чем плюсы и минусы.

Содержание статьи:

Как можно и как нельзя диагностировать хламидиоз?

У каждого метода есть свои особенности, а некоторые вообще нельзя назвать эффективными. Поэтому давайте выясним, что подходит для определения хламидиоза, а что не стоит принимать всерьез.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Это один из самых надежных анализов на хламидии. Он обнаруживает бактерию с почти 100% точностью.

ПЦР выявляет хламидии по их частицам — ДНК chlamydia trachomatis (хламидии трахоматис), как правило, в соскобе. ДНК — это крошечная молекула, которая несет в себе генетическую информацию о бактерии. Если в организме есть даже небольшое количество хламидий, то анализ без труда вычислит их по ДНК. Поэтому ПЦР является анализом № 1 в диагностике хламидиоза.

Для ПЦР обычно берут соскоб клеток слизистой или выделения из органа, в котором подозревают наличие хламидий. Соскоб могут брать с конъюнктивы глаза, из уретры, прямой кишки, канала шейки матки, задней стенки горла.

У ПЦР есть и небольшой недостаток: по нему нельзя точно сказать, живые или погибшие хламидии обнаружены в организме. Например, если сделать анализ слишком рано после курса антибиотиков (раньше, чем через месяц), он может показать хламидиоз у того, кто на самом деле успешно от него пролечился. Но если человек никогда не лечил хламидиоз, то положительный результат ПЦР означает, что бактерии в организме живы и с ними надо бороться. Поэтому важно знать, как правильно подготовиться к ПЦР: не сдавать его в течение месяца после лечения антибиотиками или — тем более — в процессе терапии.

Важно знать, что и отрицательные результаты ПЦР не означают, что болезни нет. В 2-10% случаев анализы ошибаются. В этом случае стоит провести дополнительное исследование, особенно если у человека есть явные признаки хламидиоза.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Это анализ, который хорошо распознает антитела к хламидиям в крови. В среднем его эффективность составляет 70%. ИФА всегда идет бок о бок с ПЦР и дополняет его.

С помощью ИФА исследуют иммуноглобулины — антитела к хламидиозу. Это защитные белки, которые вырабатываются в крови, когда хламидии внедряются в тело человека и начинают активно размножаться. Антитела, возникшие специально для борьбы с хламидиями, называются Anti-Сhlamydia trachomatis IgG/IgA/IgM. Кроме этого ИФА может находить антитела и против других видов хламидий — например, к chlamydia pneumoniae (хламидия пневмониэ) IgM и IgG.

По присутствию антител, а также по их количеству можно понять: есть ли у человека хламидии и какой стадией хламидиоза (острой или хронической) он болен. Также ИФА помогает определить, удачно ли прошло лечение, если анализ сдают в качестве контрольного.

Однако использовать метод ИФА как единственный не стоит — по его результатам тоже не всегда понятно, болеет ли человек хламидиозом сейчас или переболел в прошлом.

По присутствию и количеству антител к хламидиям в крови можно понять: есть ли у человека хламидиоз и какой стадией он болен

Бактериальный посев (культуральный метод)

Этот анализ на хламидиоз тоже очень точный — до 100%, но при этом столь же трудоемкий, дорогой и долгий (результатов ждут от 6 до 8 дней).

Для посева мазок, взятый у больного, помещают в специальную питательную среду. Для хламидий такая среда — это искусственно выращенный слой человеческих клеток.

Если в мазке пациента действительно были хламидии, то за несколько дней они размножаются. Это говорит о том, что у пациента точно есть хламидиоз. Дальше бактерии из посева исследуют: определяют их свойства, а также — какие антибиотики лучше действуют на них.

Из-за стоимости и долгого ожидания бак посев на хламидиоз используют довольно редко. Обычно к посеву рекомендуют прибегать в случае:

  • медико-правовых конфликтов;
  • диагностики хламидиоза у девочек до наступления месячных;
  • подозрения на хламидиоз в ротоглотке или прямой кишке.

ПИФ (он же РИФ)

Это прямая реакция иммунной флюоресценции. Это далеко не самый точный анализ на хламидии — вероятность ошибки в нем составляет целых 50%.
Вот в чем суть метода. Особый состав, в котором есть окрашенные антитела к хламидиям, наносят на клетки, взятые со слизистой пациента (соскоб). Антитела, окрашенные светящимся веществом — флюорохромом, — прочно соединяются с хламидиями. Затем остатки краски смывают.

Если в мазке имеются хламидии, то благодаря соединению с окрашенными антителами, они подсвечиваются (флюоресцируют). В итоге в мазке под микроскопом и на микро-фото хламидии выглядят как маленькие зеленые звездочки.

По большому счету, ПИФ нельзя рекомендовать ни как основной, ни даже как дополнительный анализ на хламидии. Если человеку предлагают пройти этот тест, лучше сделать выбор в пользу ИФА, ПЦР или бак посева.

Микроскопия (цитоскопия) соскоба по Романовскому-Гимзе

С помощью этого анализа можно обнаружить хламидий, но точность метода очень низкая — хламидиоз определяют лишь в 10-12% случаев.

В этом случае исследуют соскоб клеток слизистой пациента. Метод Романовского-Гимзе позволяет окрасить человеческие клетки и их «начинку» — хламидий, которые прячутся внутри. За счет этой технологии они становятся видны под микроскопом.

Вдобавок к низкой точности метод работает лишь при острой форме хламидиоза — когда бактерии внутри клеток не покрыты защитной оболочкой и видны при окрашивании. Если хламидиоз перешел в хроническую стадию, анализ вообще бесполезен.

Тест на хламидии по Романовскому-Гимзе редко предлагают в частных клиниках и лабораториях. В основном, его могут назначить в государственных мед учреждениях — поликлиниках или КВД.

Важно помнить, что этот способ очень ненадежен. Если есть выбор, лучше воспользоваться более точными методами.

Микроскопия мазка (она же бактериоскопия) по Граму

Этот метод вообще не может обнаруживать хламидий — поэтому очень важно отличать его от других, чтобы не делать бессмысленный анализ.

Микроскопия мазка — это анализ выделений человека (вагинальной слизи, спермы и других) под микроскопом с помощью другого окрашивания — по методу Ганса Грама. Именно его проводят все платные лаборатории под названием «общий мазок», «микроскопия», или «бактериоскопия».

Окрашивание по Граму позволяет увидеть разные бактерии, которые без краски незаметны под микроскопом. Также он помогает посчитать лейкоциты — вид иммунных клеток человека. Но увы: метод Грама не может выявлять хламидий, потому что они просто не окрашиваются таким способом.

В итоге микроскопия мазка по Граму показывает, в каком соотношении другие микроорганизмы населяют тот или иной орган. Также по ней можно установить, есть ли в этом органе воспаление и насколько оно сильное. Но сам хламидиоз с помощью этого теста установить никак нельзя! Ведь есть воспаление или нет, это ничего не говорит о хламидиях. Подробнее о том, в каких случая возникает воспаление при хламидиозе, читайте в специальной статье.

Анализ годится только в качестве дополнительного — чтобы оценить общее состояние конкретного органа, или при подозрении на другие заболевания.

Хламидиоз с помощью микроскопии мазка по Граму установить никак нельзя!

Мини-тест (экспресс-тест на хламидии)

Этот метод полностью бесполезен. Про него стоит знать, только чтобы не выкидывать деньги на ветер.

Анализ можно купить в аптеке и провести самостоятельно в домашних условиях. По механизму действия он очень схож с тестом на беременность: в лунку наносится несколько капель мочи или слизи из вагины, затем результат оценивают по числу полосок.

В инструкции говорится, что, если у человека есть хламидии, тест покажет две полоски.

Однако отрицательный результат теста совсем не гарантирует, что болезни нет на самом деле. Положительный, впрочем, тоже недостоверен. По сути, анализ не сообщает ничего полезного. Поэтому при подозрении на хламидиоз разумнее сдать более точные анализы.

В качестве итога рассмотрим сравнительную таблицу всех анализов на хламидиоз:

Результаты анализов

«—» — ДНК хламидий не обнаружено;

«—» (КП** ≤ 0,9) — Антитела не обнаружены;

«+/ — » (0,9 Структурная схема Anti-Сhlamydia trachomatis IgM

При подозрении на хламидиоз ИФА чаще используют как уточняющий анализ, а не как самостоятельный. По тому, какие типы антител выявит ИФА, можно судить о давности заражения и стадии хламидиоза:

Anti-Сhlamydia trachomatis IgM — появляются спустя неделю после заражения, и исчезают — спустя 2-3 месяца; положительные IgM — это самый ранний признак заражения хламидиозом;

Anti-Сhlamydia trachomatis IgA — появляются в крови через две недели после заражения и исчезают — спустя два-четыре месяца после успешного лечения. Положительные IgA — это признак активной инфекции (например, острой начальной формы или рецидива хронической болезни);

Anti-Сhlamydia trachomatis IgG — появляются спустя три—четыре недели после заражения и сохраняются положительными в течение нескольких лет. Они могут быть как признаком хронического хламидиоза, так и признаком инфекции, которую уже успешно пролечили.

Расшифровка анализа крови ИФА на хламидии:

Острый хламидиоз (заражение — одну-две недели назад)

Острый хламидиоз (заражение — две-три недели назад)

Острый хламидиоз (заражение — более трех-четырех недель назад)

Обострение давнего хламидиоза

Прошедшее (или проходящее) заболевание

Уменьшение титра антител в 2-4 раза после проведенного лечения

Уменьшение титра в 4-8 раз через 1-1.5 мес после успешного лечения

Отсутствие хламидиоза или отсутствие антител к нему

Кроме положительных и отрицательных результатов, в описании ИФА можно встретиться с таким понятием, как «титр антител» — это концентрация антител к хламидии в крови пациента. По титрам антител оценивают эффективность лечения: если титры антител после хламидиоза снизились в 2-4 раза после проведенного лечения, то оно считается эффективным.

Положительные результаты ИФА оцениваются, как серопозитивность по хламидиозу (есть антитела к этой болезни в крови), отрицательные результаты — как серонегативность (антител к хламидиозу в крови нет).

Отрицательные результаты ИФА не гарантируют, что болезни нет: встречаются и такие формы хламидиоза, при которых антитела не вырабатываются. Если по данным ПЦР или бак посева наличие хламидий подтвердилось, то даже при отрицательных результатах ИФА ставят диагноз «хламидиоз».

Какой материал берут для анализа на хламидии?

Для исследования на хламидии подходят самые разные биологические материалы организма: выделения из влагалища, соскоб или мазок со слизистой, сперма, моча, кровь… В зависимости от симптомов и формы болезни, страдают различные органы и ткани, поэтому материал берут из той области, в которой подозревают инфекцию.

Ознакомьтесь так же:  Таблетки для лечения пищевых отравлений

Как женщины сдают анализы на хламидии:

  • соскоб или мазок из мочеиспускательного канала;
  • из канала шейки матки;
  • из ротовой полости и глотки;
  • из анального канала и прямой кишки;
  • из больших преддверных и околомочевых желез;
  • из слизистой оболочки конъюнктивы глаза;
  • также сдают анализ мочи и кровь на хламидии;

Как мужчины сдают анализы на хламидии:

  • соскоб или мазок из мочеиспускательного канала;
  • из прямой кишки;
  • из ротовой полости и глотки;
  • из конъюнктивы глаза;
  • мочу и кровь.

Как проверить ребенка на хламидиоз:

  • соскоб или мазок из наружного отверстия мочеиспускательного канала;
  • из преддверия влагалища;
  • просто из влагалища;
  • из прямой кишки;
  • из ротовой полости и глотки;
  • из конъюнктивы;
  • и при использовании детских гинекологических зеркал — из канала шейки матки.

Как берут материал для анализа на хламидии?

Конечно, есть разница в том, как берут анализы на хламидии у женщин и мужчин — но сами типы процедур будут одинаковыми. На анализы можно брать кровь, а можно проводить микробиологические исследования на хламидии — изучать выделения и клетки человека под микроскопом.

Мазок — это частицы выделений, которые собирают со слизистых оболочек пациента специальной щеточкой. В мазке содержатся разные бактерии, иммунные клетки человека и другие компоненты. Чтобы выявить именно хламидиоз, мазок чаще всего исследуют с помощью ПЦР или бактериологического посева. Обычное исследование мазка под микроскопом не определяет возбудителя этой болезни. Сдавать мазок на анализ совершенно не больно.

Микрофотография: клетки в мазке при хламидиозе во время анализа по Романовскому-Гимзе

Соскоб — это процедура, при которой берут самые верхние клетки слизистой (канала шейки матки, прямой кишки, глаз, уретры). На материале соскоба проводят более серьезное лабораторное исследование. В результате специалист может изучить уже не выделения, а сами клетки слизистой оболочки. Если внутри этих клеток есть хламидии, их будет видно. Соскоб на chl trachomatis исследуют с помощью флуоресцентной микроскопии (ПИФ), микроскопии по Романовскому-Гимзе и определения ДНК (ПЦР). Сдавать соскоб на хламидии неприятно, но тоже не больно.

В моче хламидии могут содержаться, если они поразили мочеиспускательный канал. Для анализа необходима первая утренняя порция мочи в (примерно 20-30 мл.). Основной метод исследования мочи на хламидии — это ПЦР.

В крови могут содержаться и косвенные признаки хламидий — антитела к ним; а иногда — и сами хламидии, если инфекция попала в кровоток. Специальной подготовки, чтобы сдать анализ крови на хламидии не требуется. Правильнее всего сдавать кровь на голодный желудок, или хотя бы спустя 4 часа после еды. Антитела исследуются с помощью ИФА, а сами хламидии — с помощью ПЦР. Если в крови обнаружены сами хламидии — важно понимать, что это серьезное состояние. Из кровотока бактерии могут попасть в любой орган, где есть слизистые оболочки, и начать там размножаться.

Как подготовиться к анализу на хламидии?

Чтобы результаты анализов были достоверны, требуется не только опыт врачей и лаборантов, но и ответственность самих пациентов: есть правила, которые нельзя нарушать. Рассмотрим, как правильно сдавать кровь на хламидиоз и как подготовиться к мазку на хламидии женщинам (в том числе беременным) и мужчинам.

Обследование на хламидиоз нужно проводить до того, как человек начал принимать антибиотики. Причина в том, что антибактериальные препараты убивают хламидий или «загоняют» в скрытую форму. Значит, обнаружить бактерии после такого лечения будет очень трудно. Если человек принимал любые антибиотики за несколько дней до сдачи анализов (например, лечил ангину), то первый тест рекомендуется сдавать только через месяц после приема последней таблетки.

Если пациент ранее лечился местными антибактериальными препаратами (мазями, кремами, растворами антисептиков), то первый анализ рекомендуется сдавать только через 2 недели после лечения.

Cдавать материал из мочеиспускательного канала (слизь/мочу) как мужчинам, так и женщинам нужно либо до мочеиспускания, либо через 3 часа после него.

Анализ на хламидиоз у женщин проводят между менструациями: не позже, чем за 5 дней до менструации, или не раньше, чем через 5 дней после нее. Желательно, чтобы материал для анализа брали в первую половину цикла. Однако, если у женщины есть признаки сильного воспаления, то имеет смысл сдать анализ как можно быстрее, исключая только период самой менструации. За день до анализа нельзя проводить никакие спринцевания влагалища.

Беременные женщины сдают анализы по тем же правилам, что и женщины, не ожидающие ребенка. Разумеется, на них не распространяются ограничения, связанные с менструальным циклом.

В каких случаях проверяются на хламидиоз: основные показания

Основными причинами, по которым человеку стоит сдать анализы на хламидиоз, являются:

острое или хроническое воспаление: мочеиспускательного канала, шейки матки, влагалища, прямой кишки, конъюнктивы глаза, ротоглотки, легких (пневмония или бронхиолит — у детей);

подозрение на бытовое или половое заражение хламидиозом — даже если симптомов при этом нет (бессимптомная форма);

беременность, при ее осложнениях: воспаления шейки матки, влагалища, мочеиспускательного канала, при болях в животе.

более серьезные проблемы с беременностью: выкидыш, замершая беременность, другие выкидыши в прошлом;

Примеры настоящих анализов

Когда все результаты анализов приходят положительными, поставить диагноз нетрудно. Но как быть, если они противоречат друг другу? Строгих схем для диагностики хламидиоза нет. Чтобы правильно поставить диагноз, разные врачи используют разные методы и их сочетания.

Для наглядности рассмотрим примеры диагнозов у реальных пациентов:

Итоги

Среди большого разнообразия лабораторных методов важно знать, как правильно провериться на хламидиоз. Пожалуй, основное правило: к диагностике хламидиоза нужно подходить комплексно — использовать несколько видов анализов и сопоставлять их результаты. Также помните, что оценивать результаты анализов, как и назначать лечение, должен только врач.

Из существующих анализов разумнее выбирать самые точные — ПЦР, ИФА и бактериальный посев. Те же анализы хорошо подойдут и для оценки результатов лечения. Главное — помнить, что ПЦР нет смысла сдавать раньше, чем через месяц после курса антибиотиков.

Современный подход к дистрибьюции медицинских изделий

ИФА-Хламидия-IgG

Скачать Инструкцию

Скачать РУ

Диагностический антител титр к Chlamydia trachomatis в крови: для IgM — 1:200 и выше, для IgG — 1:10 и выше.

Во время острой хламидийной инфекции и вскоре после неё происходит повышение титра антител IgA, IgM и IgG к Chlamydia trachomatis в крови. Инфицированный Chlamydia trachomatis организм синтезирует антитела, однако эти антитела имеют слабое защитное действие: обычно возбудители персистируют даже при наличии высоких титров антител. Раннее интенсивное лечение может угнетать синтез антител. Вследствие относительно большой «антигенной массы» хламидий при генитальных инфекциях сывороточные антитела IgG обнаруживают довольно часто и в высоких тирах. Так, у детей с хламидийной пневмонией они могут быть очень высокими: 1:1600-1:3200.

Антитела IgM выявляют в острый период инфекции (уже через 5 дней после её начала). Пик антител IgM приходится на 1-2-ю неделю, затем происходит постепенное снижение их титра (как правило, они исчезают через 2-3 мес даже без лечения). Антитела класса IgM направлены против липополисахарида и основного белка наружной мембраны хламидий. Наличие антител IgM свидетельствует об активности хламидиоза. Антитела IgM не проникают через плаценту, синтезируются ещё у плода и относятся к собственным антителам новорождённых. Их наличие указывает на заражение (в том числе и внутриутробное) и свидетельствует об активном процессе. Титр IgM-АТ может повышаться при реактивации, реинфицировании или суперинфицировании. Период их полураспада — 5 дней.

Антитела класса IgA синтезируются к основному белку наружной мембраны и белку с молекулярной массой 60 000-62 000 хламидий. Их выявляют в сыворотке крови через 10-14 дней после начала заболевания, их титр обычно снижается к 2-4-му месяцу в результате успешного лечения. При реинфекции титр антител IgA вновь возрастает. Если после курса лечения титр антител IgA не снижается, это указывает на хроническую или персистирующую формы инфекции. Выявление высокого титра антител класса IgA нередко свидетельствует о выраженном аутоиммунном процессе у больного, наиболее часто встречают у больных с синдромом Райтера. У таких больных наличие антител класса IgA говорит о тяжёлом течении заболевания.

Антитела класса IgG появляются через 15-20 дней после начала заболевания и могут сохраняться многие годы. Реинфекция сопровождается увеличением имеющегося титра антител класса IgG. Определение титра антител к хламидиям в крови необходимо проводить в динамике, оценка результатов исследований, основанная на однократном исследовании, ненадёжна. Антитела класса IgG проникают через плаценту и формируют антиинфекционный иммунитет у новорождённых. Высокие титры IgG-АТ защищают плод от инфекции, а также женщин от возникновения сальпингита после искусственного прерывания беременности; кроме того, обеспечивают кратковременную защиту (до 6 мес) от повторного заражения хламидиями. Период полураспада IgG-АТ составляет 23 дня.

Для установления диагноза необходимо одновременно определять антитела классов IgA и IgG, при неясном результате IgA — дополнительно исследовать антитела IgM.

ИФА-Хламидия-IgG

Новорождённых и их матерей обследуют в 1-3-и сутки после родов, в случае отрицательного результата при наличии клинической картины заболевания — повторно на 5-7-е и 10-14-е сутки. Наличие антител класса IgM при повторном исследовании, свидетельствует о врождённой инфекции (материнские антитела класса IgM через плаценту не проникают). Отсутствие у новорождённых антихламидийных антител не означает отсутствия хламидийной инфекции.

Определение титра антител к Chlamydia trachomatis в крови — вспомогательный тест диагностики хламидиоза, так как из-за низкой иммуногенности у 50% больных хламидиозом антитела не обнаруживают.

Определение антител классов IgA, IgM и IgG к Chlamydia trachomatis в крови используют для диагностики хламидиозной инфекции при следующих заболеваниях:

  • уретриты, простатиты, цервициты, аднекситы;
  • пневмония, воспалительные заболевания лёгких;
  • болезнь Райтера, синдром Бехчета, инфекционные артропатии.

Заболевания, вызываемые Chlamydia trachomatis

Трахома. Хронический кератоконъюнктивит, начинается с острых воспалительных изменений конъюнктивы и роговицы и приводит к образованию рубцов и слепоте.

В соскобах с конъюнктивы методом флюоресценции определяют хламидийные антигены в эпителиальных клетках. Чаще их обнаруживают на ранних стадиях заболевания в верхней части конъюнктивы.

Урогенитальный хламидиоз и конъюнктивит. Частота обнаружения хла-мидий у мужчин с негонококковым уретритом составляет 30-50%. Инфицированность женщин, имеющих первую беременность, достигает 5-20%, делающих аборт — 3-18%. Среди больных, имеющих признаки цервицита, хламидийную инфекцию выявляют в 20-40% случаев; сальпингит — в 20-70% случаев; инфекцию мочевых путей — в 5-10% случаев.

Синдром Фитц-Хью-Куртиса также относят к ранним осложнениям хламидийной инфекции, он представляет собой острый перитонит и перигепатит, сопровождающийся асцитом.

Поражения дыхательных путей, вызываемые Chlamydia. У взрослых, больных хламидийным конъюнктивитом, нередко появляются симптомы поражения верхних дыхательных путей (фарингит, ринит, отит и др.), развивающиеся, по-видимому, в результате распространения хламидийной инфекции через носослёзный канал. Пневмония у взрослых обычно не развивается. У новорождённых, заразившихся от матерей, через 2-12 нед после родов возможны поражения респираторной системы вплоть до пневмонии.

Ознакомьтесь так же:  Ацикловир мазь простуда на губах

Синдром (болезнь) Райтера Для синдрома Райтера . характерна классическая триада: уретрит, конъюнктивит и артрит. При этом синдроме хламидии можно обнаружить в синовиальной жидкости. Отмечают возрастание титра антител классов IgA, IgM и IgG в ходе развития активной инфекции суставов.

Эндокардиты. Клинически протекают молниеносно, со значительным поражением клапанов аорты.

Латентная инфекция может проявиться спонтанно в форме малосимптомного осложнения. Более чем у половины пациентов отмечают признаки хронического простатита и/или сакроилеита.

В настоящее время для диагностики хламидийной инфекции используют методы, позволяющие обнаружить антигены Chlamydia trachomatis в исследуемом материале (ИФА, метод флюоресцирующих антител, ПЦР). Определение титра Аантител в сыворотке крови к Chlamydia trachomatis — вспомогательный метод диагностики хламидиоза.

Диагностика хламидиоза.
Методы иммуноферментного анализа

Эти методы основаны на обнаружении растворимого антигена хламидий в исследуемых пробах. Чаще используются наборы реактивов Imx Select Хламидия (Abbott Laboratories) и Chlamydia-antigen Elisa (Medac Diagnostica).

Методика:

Тест Imx Select Хламидия основан на технологии ИФА-анализа на микрочастицах (МИФА) и предназначен для качественного определения липолисахаридного антигена C. trachomatis в эндоцервикальных и уретральных мазках на анализаторе Imx. Данный набор содержит компоненты, полученные из человеческого материала, что обуславливает соблюдение при работе правил биологической безопасности.

Узел проотборник/электрод добавляет микрочастицы в лунку, содержащую образец. Предварительно экстрагированный липолисахаридный антиген (ЛПС) образца связывается с микрочастицами. Аликвота реакционной смеси, содержащей комплексы микрочастиц с ЛПС антигеном, переносится на стекловолокнистый матрикс реакционной ячейки.

Микрочастицы необратимо связываются с матриксом. К матриксу добавляются кроличьи антитела против хламидии. Они связываются с ЛПС антигеном. Биотинилированные козьи анти-кроличьи антитела добавляются к матриксу и связываются с комплексом анти-хламидия/ЛПС антиген. К матриксу добавляется конъюгат щелочной фосфатазы и антител против биотина. Происходит связывание конъюгата с комплексом антиген/ антитело. После удаления не связавшегося материала промыванием к матриксу добавляется субстрат 4-метилумбеллиферилфосфат. Образование флуоресцирующего продукта измеряется в оптическом узле МИФА.

Тест-система Сhlamydia-Antigen-ELISA medac (регистрационное удостоверение Минздрава РФ № 97/128 от 07.02.97 г.) является экономным и в то же время достаточно специфичным и чувствительным методом в рутинной диагностике хламидийной инфекции. Этот тест представляет собой метод твердофазного ИФА-анализа для определения антигенов хламидий. Твердая фаза покрыта хламидийными моноклональными антителами установленной специфичности. Амплификация достигается с использованием технологии полимерной конъюгации, в результате чего происходит фиксация, при которой на каждый связанный участок антигена приходится полимерный комплекс с высокомолекулярным фрагментом.

Кроме того, амплификация выполняется на стадии обозначенного воспроизведения с использованием запатентованной технологии фермент-амплификации. Визуально положительные пробы окрашиваются в желто-оранжевый цвет. Интенсивность окраски пропорциональна количеству антигена хламидии. Точный результат исследования определяют с помощью микроЭВМ, спектрофотометра “Мультискан” или другого аппарата для ИФА при длине волны 492 нм. Образцы дающие значения поглощения выше или равные значению отсекающего поглощения (cut-off), считаются положительными для хламидии. Чувствительность и специфичность ИФ методов соответственно составляет 65-70% и 90-100% . Показания к применению такие же , как и для метода прямой иммунофлюресценции.

Выявление в сыворотке крови антител к липополисахаридному антигену хламидий класов Ig G, Ig A, Ig M с определением их титра позволяет определить стадию заболевания, обосновать необходимость антибактериального лечения и оценить его эффективность.

Показания к выявлению антихламидийных антител классов Ig G, Ig A, Ig M в сыворотке крови методом ИФА:

  1. Определение стадии заболевания:
    • острая, первичная;
    • хроническая;
    • реактивация или реинфекция;
    • состояние после реконвалесценции (остаточная серология).
  2. Оценка эффективности проводимого лечения (наряду с исследованием методами ПЦР, культурального посева).
  3. Установление хламидийной этиологии экстрагенитальных поражений (артриты, пневмонии, заболевания глаз).

Тест-системы:

Cравнивая различные диагностические наборы мы рекомендуем использовать тест-систему r-Elisa фирмы MEDAC DIAGNOSTICA (Германия). Регистрационное удостоверение Минздрава РФ №97 от 7.02.97 г. Это иммуноферментные наборы для выявления антихламидийных антител классов Ig G, Ig A, Ig M с определением их количественного титра в сыворотке крови по одной точке. Антиген получен методами генной инженерии. В качестве антигена твердой фазы используется специфические рекомбинантные липополисахаридные фрагменты хламидий, отсутствующие в липополисахаридах других бактерий. Выбирая тест-систему, где в качестве антигена используются липополисахаридные фракции, мы исходили из предположения, что обследуемое лицо может в течении жизни подвергаться инфицированию не только C.trachomatis, но и C.pneumonia , и C.psitacci с выработкой к ним соответствующих антител. Выявление их количественного титра и его динамики является важнейшим показателем эффективности проводимого лечения.

Интерпретация результатов:

В промежутке между пятым и двадцатым днями после появления клинических симптомов заболевания последовательно возникают антитела этих трех классов к специфическому хламидийному липополисахариду. Ig M является маркером острой стадии, он определяется уже через пять дней после начала заболевания. Изменения продуцирования Ig M на определяемое продуцирование Ig A может происходить в течение 10 дней после появления симптомов заболевания. В течение короткого периода могут одновременно присутствовать Ig M и Ig A. В это же время или с небольшой задержкой — 2-3 недели могут быть определены IgG. Прогрессирование заболевания, переход в хроническую стадию характеризуется появлением Ig A, Ig G- антител.

Chlamydia trachomatis, IgМ

Антитела класса IgM к возбудителю урогенитального хламидиоза (Chlamydia trachomatis) – специфические иммуноглобулины, вырабатывающиеся в организме человека в первую очередь после инфицирования возбудителем. Они являются ранним серологическим маркером данной инфекции.

Синонимы русские

Антитела класса IgМ к Chlamydia trachomatis, иммуноглобулины класса М к возбудителю хламидиоза

Синонимы английские

Anti-Chlamydia tr.-IgМ, Chlamydia tr. Antibodies, IgМ.

Метод исследования

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Chlamydia trachomatis, IgМ, – это антитела (иммуноглобулины, факторы иммунитета), которые вырабатываются при хламидийной инфекции в острый период ее развития.

Хламидийная инфекция, или хламидиоз, – это совокупность заболеваний, которые вызываются микроорганизмами из рода хламидия.

Хламидии – это разновидность бактерий. Их особенностью является то, что в процессе своего эволюционного развития они утратили ряд функций обмена веществ, необходимых для самостоятельной жизнедеятельности, и могут размножаться только внутри других биологических клеток. В связи с этим они классифицируются как внутриклеточные паразиты.

Жизненный цикл хламидий состоит из двух фаз. Первая фаза – внеклеточная, когда хламидии находятся в спороподобной форме и называются элементарными тельцами (они нечувствительны к антибиотикам). После проникновения внутрь клетки хламидии превращаются в ретикулярные тельца – биологическую форму, которая активно размножается; в этот период хламидии чувствительны к антибактериальной терапии. Такая особенность объясняет склонность данного вида инфекции к длительному хроническому течению.

Заболевания у человека вызывает четыре вида хламидий, одним из них является Chlamydia trachomatis. Этот вид имеет несколько разновидностей (серотипов), каждый из которых склонен к поражению того или иного органа. Chlamydia trachomatis инфицирует определенные виды клеток, покрывающие слизистую оболочку мочеиспускательного канала, внутреннюю поверхность шейки матки у женщин, заднюю стенку глотки, слизистую оболочку прямой кишки, конъюнктивы глаз, а также дыхательных путей у детей в первые месяцы их жизни.

Инфицирование хламидиями происходит в результате прямого контакта слизистых оболочек с возбудителем, обычно во время незащищенного полового акта. Новорожденные могут заражаться во время прохождения родовых путей.

Инкубационный период от момента заражения до появления первых симптомов заболевания продолжается от 7 до 20 дней и более. Иногда видимые признаки не развиваются. Это или бессимптомное носительство, или случаи, когда симптомы заболевания незаметны, но при этом структуры и функции тканей медленно нарушаются (персистирующая форма заболевания).

У женщин хламидийная инфекция чаще всего протекает в виде воспаления канала шейки матки, откуда оно переходит в полость матки и маточные трубы. Воспаление маточных труб (сальпингит) является самым распространенным осложнением хламидиоза и может приводить к непроходимости маточных труб и в итоге к бесплодию или трубной (внематочной) беременности. Особенностью хламидиоза придатков матки является склонность к отсутствию специфических симптомов болезни и длительное течение. В некоторых случаях инфекция распространяется выше, на органы брюшной полости.

У мужчин хламидиоз может присутствовать как воспаление мочеиспускательного канала (уретрит), семявыводящих протоков (эпидидимит). В некоторых случаях происходит воспаление предстательной железы (простатит).

От 5 до 20 % беременных женщин имеют хламидийную инфекцию канала шейки матки. Примерно половина детей, которые рождаются у них, инфицируется во время родов. У половины из инфицированных детей развивается хламидийный конъюнктивит, 10 % заболевает воспалением легких.

При половых контактах хламидийная инфекция может вызывать острое воспалительное заболевание – венерическую лимфогранулему. По мере развития заболевания увеличиваются лимфатические узлы и нарушается самочувствие. В дальнейшем возможны осложнения, связанные с изменениями в половых органах и прямой кишке.

Инфицирование хламидиями сопровождается появлением в организме антител (иммуноглобулинов): IgМ, IgA, IgG. Продукция каждого из них связана с определенной стадией инфекционного процесса, так что по их появлению и количеству в крови можно судить о стадии заболевания.

Антитела класса IgМ появляются на самом начальном этапе (через 5 дней с момента инфицирования), раньше других иммуноглобулинов. Наличие IgМ при отсутствии других видов антител (IgA, IgG) указывает на первичное инфицирование хламидиями, которое произошло не более 2 недель назад. Особую ценность это свойство IgМ имеет при диагностике хламидиоза у новорожденных детей, так как антитела этого вида проникают через плацентарный барьер в организм ребенка из крови матери. Это означает, что IgМ могут появиться в организме ребенка только в результате начала активного инфекционного процесса. Через 2-3 месяца с момента инфицирования антитела IgМ исчезают из кровотока независимо от того, проводится ли терапия заболевания или нет. Таким образом, отсутствие IgМ на фоне высокой концентрации IgA и IgG указывает на то, что заболевание протекает более 2-3 месяцев.

Для чего используется исследование?

  • Для выявления первичного инфицирования хламидиозом.
  • В целях диагностики хламидиоза у новорожденных детей.
  • Для определения стадии возникшего в результате инфицирования хламидиями заболевания, требующего незамедлительного лечения.
  • Для принятия решения о целесообразности проведения антибактериальной терапии.

Когда назначается исследование?

  • При симптомах хламидийной инфекции. У женщин это выделения из половых путей, жжение, зуд в области половых органов, боли внизу живота. У мужчин – жжение при мочеиспускании, выделения из мочеиспускательного канала, боль, зуд в области половых органов.
  • При симптомах конъюнктивита и/или воспаления легких у новорожденного.
  • Когда требуется установить стадию хламидийной инфекции.
  • Если при терапии антибиотиками необходимо определить ее эффективность.

Что означают результаты?

Результаты анализа говорят о наличии или отсутствии острого инфекционного процесса, времени его возникновения/рецидива, а также о том, является ли заболевание следствием первичного инфицирования или обострением хронической патологии.

Ознакомьтесь так же:  Обнаружены антитела к вирусу простого герпеса 6 типа

Причины положительного результата:

  • инфицирование хламидиозом произошло менее двух недель назад (если при этом результат анализа на IgА и IgG отрицательный);
  • обострение хронической хламидийной инфекции (если результат анализа на IgG положительный).

Причины отрицательного результата:

  • отсутствие инфицирования хламидиями (если при этом результаты анализа на IgА и IgG также отрицательные);
  • инфицирование произошло менее 5 дней назад;
  • инфицирование хламидиями произошло более 2-3 месяцев назад (если при этом результат анализа на IgG положительный).



Важные замечания

  • Отрицательный результат анализа может быть получен, если прошло менее двух недель от начала инфекционного процесса.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, акушер-гинеколог, педиатр, неонатолог, инфекционист.

Урогенитальная хламидийная инфекция

Хламидийная инфекция вызывается Chlamydia trachomatis – грамотрицательной бактерией, принадлежащей семейству Chlamydiaceae. Вид Chlamydia trachomatis включает различные серовары, которые вызывают отдельные нозологические формы заболеваний. Сероваровы A, B, C вызывают трахому, L1, L2, L3 – венерическую лимфогранулему. Наибольшее распространение в странах Европы, Южной и Северной Америки и в России получили серовары D–K, которые передаются при половых контактах и вызывают урогенитальную хламидийную инфекцию (УХИ). Возможна перинатальная передача с развитием у новорожденных конъюнктивита или пневмонии. C.trachomatis имеет уникальный среди других возбудителей ИППП жизненный цикл. Инфицирование эпителиальных клеток происходит метаболически неактивными формами хламидий – элементарными тельцами (ЭТ). Внутри клеток ЭТ трансформирутся в ретикулярные тельца (РТ) – метаболически активные, делящиеся формы. Накопление внутри эпителиальных клеток новых генераций РТ и их параллельная трансформация обратно в ЭТ истощает ресурсы клеток хозяина, приводя их к гибели, высвобождению ЭТ и новому циклу инфицирования. Неосложненная хламидийная инфекция протекает у мужчин чаще всего в форме уретрита, у женщин – в форме слизисто-гнойного цервицита. Симптомы и проявления УХИ неспецифичны, для постановки диагноза УХИ необходимы лабораторные исследования для выявления возбудителя или его маркеров. Значительная часть случаев УХИ – от 40 до 60% протекает в бессимптомной или малосимптомной форме и проявляется уже на стадии осложнений. Основными осложнениями УХИ являются: эпидидимит, эндометрит, сальпингит, сальпингоофорит, внематочная беременность, трубное бесплодие, болезнь Рейтера.

Показания к назначению лабораторных исследований. У мужчин: наличие симптомов и клинических проявлений уретрита, эпидидимита или эпидидимоорхита; у лиц, практикующих аногенитальные контакты – проктита; при физикальном осмотре – наличие выделений из уретры.

У женщин: наличие симптомов воспалительного процесса в нижних отделах урогенитального тракта и органах малого таза, боли в низу живота, патологические выделения из влагалища; наличие слизистых или слизисто-гнойных выделений из цервикального канала, нарушение менструального цикла, болезненность при половых контактах; подготовка к хирургическому вмешательству на органах малого таза; подготовка к беременности, отягощенный акушерско-гинекологический анамнез, связанный с инфекционной патологией.

У лиц обоего пола без симптомов и признаков воспалительного процесса урогенитального тракта: наличие перечисленных выше симптомов и признаков или установленная УХИ у полового партнера; в возрастной группе до 25 лет – многочисленные половые партнеры или половые контакты с новым половым партнером без барьерной контрацепции.

Дифференциальная диагностика. Гонорея, урогенитальный трихомониаз, инфекция, вызванная M.genitalium.

Этиологическая диагностика включает визуальное обнаружение C.trachomatis, выделение культуры C.trachomatis, выявление АГ, ДНК и РНК C.trachomatis и АТ к микроорганизму.

Материал для исследований

  • Мазки/соскобы со слизистых оболочек цервикального канала и уретры женщин – микроскопические исследования, культуральные исследования, выявление АГ, обнаружение ДНК, РНК;
  • мазки/соскобы со слизистой влагалища, мазки (соскобы) со слизистой прямой кишки – выявление ДНК, РНК;
  • мазки/соскобы с конъюнктивы глаз – культуральные исследования, выявление ДНК;
  • моча (у мужчин) – выявление ДНК;
  • сыворотка крови – выявление АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Для визуального выявления C.trachomatis возможно применение световой или люминесцентной микроскопии. При применении световой микроскопии используется фиксированный препарат биологического материала, окрашенный по Романовскому- Гимзе, в котором выявляют измененные клетки цилиндрического эпителия, содержащие ЭТ и РТ C.trachomatis, получившие название телец ГальберштедтераПровачека. Диагностическая чувствительность исследования не превышает 10%. Распространенным приемом выявления хламидий является определение АГ микроорганизма методом ПИФ. С помощью люминесцентной микроскопии в препарате, обработанном флуоресцентно-меченными АТ к хламидиям, по характерному свечению обнаруживаются ЭТ C.trachomatis. Микроскопические исследования, в первую очередь ПИФ, достаточно просты в исполнении и не требует дорогостоящего оборудования, однако весьма требовательны к качеству полученного биологического материала, технике нанесения препарата на стекло и специфичности используемых АТ. Материал для выполнения ПИФ должен содержать достаточное количество клеток цилиндрического эпителия, его получают из цервикального канала (по показаниям – из уретры) и у мужчин из передней уретры. Для интерпретации результата необходимо наличие в препарате не менее 5–10 клеток цилиндрического эпителия (отражает качество получения биоматериала) в поле зрения и не менее 10 флуоресцирующих ЭТ. Диагностическая чувствительность метода ПИФ варьирует в широких пределах – от 10 до 65%. Максимальная чувствительность и специфичность метода отмечена у пациентов с клиническими проявлениями инфекции и высокой бактериальной нагрузкой, минимальная – при бессимптомных или малосимптомных формах.

Для культивирования C.trachomatis в условиях in vitro используются чувствительные к микроорганизму эукариотические клеточные линии – HeLa, McCoy, L-929, в которых происходит развитие хламидий. В процессе исследования ЭТ, содержащиеся в биологическом материале, инфицируют чувствительные клетки культуры и размножаются в них. Через 48–72 часа после заражения в культуре накапливаются клетки, содержащие включения – размножившиеся РТ и ЭТ. Результат культурального исследования оценивается визуально при использовании метода ПИФ с помощью люминесцентной микроскопии. Культуральный метод долгое время рассматривался в качестве «золотого стандарта» диагностики, поскольку обладал большей чувствительностью по сравнению с методом световой микроскопии и иммунологическими методами при практически 100% специфичности. Однако эффективность метода в значительной степени зависит от состояния используемой клеточной линии – ее жизнеспособности и восприимчивости к инфицированию хламидиями, на которые могут оказывать негативное влияние продукты жизнедеятельности, содержащиеся в биологическом материале, антибиотики, местные бактерицидные препараты, химические компоненты урогенитальных зондов и тампонов, и др. Другим важным условием является сохранение жизнеспособности самих хламидий в исследуемом биологическом материале. Диагностическая чувствительность метода с учетом указанных выше факторов варьирует от 40 до 85%.

Для выявления АГ C.trachomatis за рубежом был разработан ряд тестов на основе ИФА. Диагностическая чувствительность выявления АГ C.trachomatis находится в пределах 55–78%. Указанные тесты получили широкое распространение в зарубежной лабораторной практике, однако в РФ не применяются.

Выявление АТ классов IgA, IgM и IgG к АГ C.trachomatis в крови осуществляется методами МИФ или ИФА. Метод МИФ рассматривается как «золотой стандарт » определения АТ к АГ хламидий, он позволяет проводить серотипирование. При определении АТ IgM МИФ обладает большей чувствительностью, чем ИФА, что важно при диагностике хламидийной инфекция у новорожденных. Однако исследование достаточно трудоемко и требует дорогостоящих высокоочищенных АГ C.trachomatis, поэтому метод ИФА получил наибольшее распространение в международной и отечественной практике Выявление АТ IgA может свидетельствовать о наличии острой или обострении хронической инфекции. Для правильной оценки результатов определения АТ с помощью ИФА необходимо учитывать несколько важных условий. При неосложненной УХИ основную роль играет местное звено иммунной системы с участием специфических и неспецифических факторов. На сроки появления и уровень циркулирующих в крови АТ влияют индивидуальная иммунологическая реактивность организма, сроки инфицирования, продолжительность инфекции, повторные случаи инфицирования, уровень бактериальной нагрузки и целый ряд других факторов. Поэтому АТ в крови могут появляться в срок от нескольких недель до нескольких месяцев после инфицирования. Элиминация АТ может происходить в течение нескольких лет или же сохраняться практически на всю жизнь.

Для выявления ДНК C.trachomatis в РФ используют преимущественно ПЦР с различными вариантами детекции продуктов реакции и метод выявления РНК C.trachomatis на основе НАСБА. Диагностическая чувствительность метода ПЦР для диагностики УХИ находится в пределах от 90 до 98%, специфичность достигает 96–98%. Диагностическая чувствительность метода НАСБА достигает 98%, диагностическая специфичность – до 100%.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Микроскопическое исследование препаратов с окраской по Романовскому-Гимзе в настоящее время не используется и не рекомендуется для диагностики УХИ. В то же время, всем пациентам с симптомами и клиническими проявлениями урогенитальной инфекции показано микроскопическое исследование с окраской по Граму для установления лабораторных признаков воспаления (повышенное содержание ПМЯЛ).

Применение метода ПИФ целесообразно в качестве метода быстрой диагностики при наличии у пациентов выраженных проявлений инфекционно-воспалительного процесса в урогенитальном тракте при условии соблюдения всех требований получения биологического материала. Метод не подходит для скрининга, диагностики хронических форм хламидийной инфекции, контроля лечения и исследования образцов мочи и слизистой влагалища, прямой кишки, ротоглотки.

С учетом того, что для проведения культурального исследования необходима технология ведения эукариотических клеточных линий и соответствующие для этого лабораторные условия, то применение метода в рутинной лабораторной практике ограничено. Метод в первую очередь имеет большое значение в научных исследованиях, когда требуется выделить живой возбудитель для его дальнейшего изучения.

Определение АТ к C.trachomatis может быть использовано для эпидемиологических исследований, с целью интегральной оценки доли лиц в популяции, контактировавшей с C.trachomatis. В клинической практике определение АТ показано при ретроспективном анализе возможной хламидийной этиологии при бесплодии, длительных хронических воспалительных процессах урогенитального тракта. Однако и в этом случае положительные результаты обнаружения АТ должны рассматриваться в контексте других клинических, анамнестических и лабораторных данных.

В настоящее время выявление ДНК методом ПЦР считаются основой лабораторной диагностики УХИ. Исследование показано и для контроля результатов лечения. При использовании метода ПЦР с учетом скорости элиминации ДНК C.trachomatis контроль лечения необходимо проводить не ранее 3–4 недель. РНК возбудителя является более ранним маркером ответа на терапию, поэтому с помощью метода НАСБА можно оценивать эффективность лечения через 1–2 недели после окончания курса.

Особенности интерпретация результатов лабораторных исследований. Результаты, полученные методом ПИФ, рекомендуется подтверждать с помощью культурального или молекулярно-биологических методов.

Положительные результаты культурального исследования не требуют дополнительного подтверждения и означают наличие инфекции. Отрицательный результат означает как отсутствие возбудителя, так и может свидетельствовать о неоптимальных условиях для его культивирования.

При обнаружении ДНК C.trachomatis у пациентов с клинической симптоматикой урогенитальной инфекции или наличии факторов, способствующих инфицированию, дополнительного исследования не требуется, диагноз урогенитальной инфекции считается установленным. У пациентов, у которых обнаружена ДНК C.trachomatis, но отсутствуют субъективные и объективные признаки инфекционно- воспалительного заболевания и факторы риска, для подтверждения диагноза рекомендуется провести исследование для выявления РНК C.trachomatis методом НАСБА. Наличие ДНК и РНК патогена является объективным лабораторным признаком инфекции.

При оценке результатов выявления АТ следует учитывать, что их наличие или отсутствие не отражает наличие или отсутствие инфекции в данный момент времени.