Диагностика криптоспоридиоза

IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум — 2017

ДИАГНОСТИКА КРИПТОСПОРИДИОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В УДМУРТСКОЙ РЕСПУБЛИКИ

Заболевания, вызванные кокцидиями, широко распространенны в нашей стране. Много работ посвящены эймериозу, возбудителями которого являются Eimeria zurni, Е. smithi, Е. ellipsoidalis, Е. bukidnonensis из сем. Eimeriidae. Но существует и другое, не менее вредоносное заболевание – криптоспоридиоз, пагубно влияющее на организм животных: отказ от корма, развитие поноса, наступление обезвоживания организма, исхудание, гибель животного. Возбудитель относится к типу Apicomplexa, классу Sporozoa, отряду Coccidia, роду Criptosporidium, паразитируют два вида: Criptosporidium muris и С. parvum[1,2].

Возбудитель Criptosporidium крупного рогатого скота сложно обнаружить даже в лабораторных условиях, так как для этого необходимы специальные методы окраски нативных мазков, что затрудняет постановку диагноза [3].

На основании вышесказанного, актуальность данной работы заключается в проведении диагностических мероприятий и их сравнение с целью выявления ооцист Criptosporidium и анализа степени зараженности различных возрастных групп крупного рогатого скота СПК «Чутырский».

Материалы и методы.

Исследования выполняли в племенном хозяйстве СПК «Чутырский» Игринского района Удмуртской Республики. Материалом для исследования служили пробы фекалий от различных половозрастных групп животных. Всего исследовали 140 голов крупного рогатого скота. Степень зараженности животных определяли общепринятыми копрологическими методами, с дополнительной лабораторной диагностикой, а именно изготовление мазков-отпечатков с дальнейшим окрашиванием по Циль-Нильсену и Романовскому- Гимзе.

Результаты исследования и обсуждения

Сравнивая различные лабораторные методы диагностики, выявили максимальное количество ооцист Criptosporidium при окраске нативных мазков по Циль-Нильсену. Определяя степень зараженности животных, получили следующие результаты, представленные на рисунке 1.

На основании полученных результатов, нами была выявлена вполне объяснимая динамика экстенсивности инвазии между различными возрастными группами животных. Наиболее высокая степень зараженности отмечалась в группе телят до года – 85,72%. В последующих возрастных группах наблюдается тенденция к снижению инвазии. У коров регистрировали единичные случаи, что указывает на паразитоносительство.

Заключение

Таким образом, можно сделать выводы, что диагностические исследования необходимо проводить комплексно с учетом копрологических методов и подтверждать диагноз специальными методами окрашивания нативных мазков по Циль-Нильсену.

Установили, что молодняк крупного рогатого скота наиболее подвержен криптоспоридиозу. В последующем с возрастом наблюдается снижение инвазии, так как формируется возрастной иммунитет и повышается общая резистентность организма животных к данной инвазии, это необходимо учитывать при планировании мер борьбы с криптоспоридиозом крупного рогатого скота.

Литература:

1. Акбаев М. Ш., Водянов А. А. Паразитология и инвазионные болезни: учебник, М.: 460с.- 2002г.

2. Кряжев А. Л., Лемехов П. А. Криптоспоридиоз телят в хозяйствах молочной специализации Северо-Запада России: монография. – Вологда – Молочное: ИЦ ВГМХА, 2010. – 111с.

3. Якубовский М. В. Паразитарные зоонозы.; под. ред. М.В. Якубовского. – Минск: Наша Идея, 2012. – 384 с.

Криптоспоридиоз

Криптоспоридиоз — протозойная инфекция, вызываемая криптоспоридиями и протекающая с преимущественным поражением пищеварительного тракта.

Возбудители протозойной инфекции — внутриклеточные паразиты криптоспоридии (Cryptosporidium), принадлежат к классу споровиков (Sporozoasida), подклассу кокцидий (Coccidiasina). Для человека патогенны криптоспоридии вида C. parvum.

Весь жизненный цикл паразита протекает в организме единственного хозяина (животного или человека), который выделяет инвазионные ооцисты с испражнениями. Ооцисты криптоспоридий могут долго сохранять свои патогенные свойства во внешней среде. Заражение криптоспоридиозом происходит по фекально-оральному механизму (при употреблении контаминированной возбудителями воды, молока, пищи), реже – при контакте с инфицированными животными или человеком, гомосексуальном половом контакте. Кроме этого, спорозоиты из ооцист могут высвобождаться непосредственно в кишечнике, не покидая организма хозяина, что обусловливает механизм аутоинфекции при криптоспоридиозе.

Спектр клинических проявлений криптоспоридиоза достаточно широк. Прежде всего он зависит от иммунологического статуса пациента. Основным и наиболее типичным клиническим проявлением заболевания как у пациентов с нормальной иммунной системой, так и с иммунодефицитными состояниями является профузная водянистая диарея.

У пациентов с нормальной иммунной системой диарея развивается, как правило, остро, продолжается от нескольких дней до 2 нед, после чего всегда проходит самостоятельно. В противоположность у больных СПИДом диарея развивается постепенно, протекает тяжелее (в среднем 3–6 л в сутки, реже – до 20 л в сутки), может продолжаться несколько месяцев и часто приводит к угрожающему жизни пациента обезвоживанию и электролитным нарушениям. Крайне редко при криптоспоридиозе отмечаются субфебрильное повышение температуры тела и гриппоподобный синдром – миалгия, головная боль, слабость, анорексия.

В то время как у пациентов с нормальной иммунной системой симптоматика криптоспоридиоза ограничивается только диареей, то при иммунодефицитных состояниях может наблюдаться как кишечная, так и внекишечная симптоматика, связанная с поражением дыхательных путей, поджелудочной железы и желчевыводящих путей.

Респираторное инфицирование сопровождается кашлем, затруднением дыхания и одышкой, охриплостью голоса. При этом у пациентов не обязательно имеется поражение кишечника.

Криптоспоридиоз желчевыводящих путей может проявляться холециститом, значительно реже – гепатитом и склерозирующим холангитом, что клинически проявляется лихорадкой, болью в правом подреберье, желтухой, тошнотой, рвотой и диареей. Могут повышаться уровень билирубина, активность щелочной фосфатазы и трансаминаз. Диагностика билиарного криптоспоридиоза основана на биопсии и обнаружении различных стадий развития криптоспоридий в желчевыводящих путях. Поражение криптоспоридиями поджелудочной железы встречается крайне редко. Описано лишь 8 таких случаев у ВИЧ-инфицированных пациентов.

Бронхолегочный (респираторный) криптоспоридиоз характеризуется лихорадкой, лимфаденопатией, длительным кашлем со скудной слизистой, реже слизисто-гнойной мокротой, одышкой, цианозом. В мокроте можно обнаружить ооцисты криптоспоридий. При биопсии выявляется метаплазия поверхностных эпителиальных клеток бронхов. У больных СПИДом описана и двусторонняя интерстициальная пневмония, обусловленная криптоспоридиями. Ооцисты при этом выявляют в альвеолярных макрофагах. Респираторный криптоспоридиоз завершается смертью больных, несмотря на массивную химиотерапию.

Дифференциальная диагностика острых кишечных инфекций и подтверждение криптоспоридиоза основано на обнаружении ооцист возбудителя в испражнениях. С этой целью применяются методы окрашивания мазков фекалий по Цилю-Нильсену, Романовскому-Гимзе, Кестеру. Возможно обнаружение антигена криптоспоридий в кале методами ИФА, РЛА, ПЦР, а также в крови с помощью иммунофлюоресцентного или иммуноферментного анализа.

Различают кишечную, респираторную, конъюнктивальную и смешанную формы криптоспоридиоза.

При проявлении симптомов заболевания, обратитесь к врачу-инфекционисту.

При бронхолегочной форме криптоспоридиоза проводится бронхоскопия. Эндоскопически обнаруживаются признаки трахеита и бронхита; в полученном материале (мокроте, аспирате трахеи и бронхов, биоптате бронхов) выявляются ооцисты криптоспоридий. Рентгенологическое исследование легких позволяет увидеть картину двухсторонней интерстициальной пневмонии. Для подтверждения криптоспоридиоза желчных путей прибегают к чрескожной пункции желчного пузыря и внутрипеченочных желчных протоков.

Большинство инфекционистов считает, что лица с нормальной иммунной системой, легким или среднетяжелым течением инфекции не нуждаются в специальном лечении криптоспоридиоза. Для купирования клинических проявлений достаточно назначения диеты, оральной регидратации, ферментов, антидиарейных средств. В тяжелых случаях, в т. ч. иммунокомпрометированным лицам, необходимо назначение антибактериальных препаратов группы макролидов, фуразолидона, метронидазола, дараприма, спирамицина и др.; проведение коррекции водно-электролитного состояния с помощью инфузий водно-солевых растворов.

Наибольшую опасность криптоспоридиоз представляет для детей до 2-х лет, пациентов с иммунодефицитными состояниями и получающих длительную иммуносупрессивную терапию.

редотвратить или минимизировать риск заражения криптоспоридиозом позволит обеззараживание сточных вод, кипячение водопроводной воды, установка дополнительных фильтров для очистки воды, санитарное просвещение, соблюдение противоэпидемического режима в детских и лечебных учреждениях, а также мер личной гигиены.

Криптоспоридиоз

Криптоспоридиоз — протозойная инфекция, вызываемая криптоспоридиями и протекающая с преимущественным поражением пищеварительного тракта. Типичные клинические проявления криптоспоридиоза включают профузную водянистую диарею, тошноту, рвоту, спастические боли в животе. У лиц с иммунодефицитом, наряду с тяжелой гастроинтестинальной формой, может развиваться криптоспоридиоз желчевыводящих путей и респираторного тракта. Криптоспоридиоз диагностируется путем выявления ооцист криптоспоридий в пробах испражнений; реже с помощью ИФА, РИФ, ПЦР. Лечение криптоспоридиоза включает диету, регидратацию, ферменты; по показаниям – антибиотики.

Криптоспоридиоз

Криптоспоридиоз – паразитарная кишечная инвазия, характеризующаяся гастроэнтеритом с диарейным синдромом. Наряду с сальмонеллезом, шигеллезами, кампилобактериозом, ротавирусной инфекцией, лямблиозом, криптоспоридиоз является одной из наиболее частых кишечных инфекций человека. Распространенность криптоспоридиоза в индустриально развитых странах составляет 1-3%; в развивающихся странах с низким уровнем санитарной культуры – 5-10%. Риск заболеваемости криптоспоридиозом выше среди детей и иммунокомпрометированных пациентов (т. ч. ВИЧ-инфицированных), у которых инфекция может приобретать тяжелое течение. Возможны внутрибольничные вспышки криптоспоридиоза, случаи группового заражения в детских садах, школах, семьях.

Причины криптоспоридиоза

Возбудители протозойной инфекции — внутриклеточные паразиты криптоспоридии (Cryptosporidium), принадлежат к классу споровиков (Sporozoasida), подклассу кокцидий (Coccidiasina). Для человека патогенны криптоспоридии вида C. parvum. Весь жизненный цикл паразита протекает в организме единственного хозяина (животного или человека), который выделяет инвазионные ооцисты с испражнениями. Ооцисты криптоспоридий могут долго сохранять свои патогенные свойства во внешней среде.

Заражение криптоспоридиозом происходит по фекально-оральному механизму (при употреблении контаминированной возбудителями воды, молока, пищи), реже – при контакте с инфицированными животными или человеком, гомосексуальном половом контакте. Кроме этого, спорозоиты из ооцист могут высвобождаться непосредственно в кишечнике, не покидая организма хозяина, что обусловливает механизм аутоинфекции при криптоспоридиозе.

Широкое распространение криптоспоридиоза в популяции отчасти объясняется малой инфицирующей дозой криптоспоридий: заболевание может вызвать даже попадание в ЖКТ 1-10 ооцист; средняя инфицирующая доза составляет около 132 ооцист. Уникальной особенностью ооцист криптоспоридий является их резистентность к дезинфицирующим средствам (в частности, к хлору), а также малый размер (4-7 мкм), что позволяет им свободно проникать через многие фильтры. Большая часть современных технологий очистки воды не позволяет добиться 100%-ной задержки ооцист криптоспоридий, поэтому водный путь заражения криптоспоридиозом рассматривается на сегодняшний день как ведущий. Повышенный риск заражения криптоспоридиозом имеют дети до 10 лет, животноводы, ветеринары, лаборанты, медицинский персонал инфекционных отделений.

В пищеварительном тракте человека оболочки ооцисты разрушаются, и из нее высвобождаются спорозоиты, которые проникают в энтероциты, отграничиваясь от цитоплазмы клетки двойной оболочкой. В эпителиальных клетках кишечника спорозоиты превращаются в трофозоиты, а затем, в результате множественного деления – в шизонты и мерозоиты I типа. Последние способны прикрепляться к другим эпителиальным клеткам, увеличивая численность паразитов. Кроме этого, после нескольких циклов бесполого размножения мерозоиты I типа трансформируются в мерозоиты II типа, образующие мужские и женские гаметы. После слияния половых клеток образуется зигота, которая затем развивается в ооцисту.

Примерно 80% ооцист криптоспоридий имеют толстую клеточную стенку и выделяются во внешнюю среду с фекалиями или глоточной слизью. Остальные ооцисты являются тонкостенными; их них в просвет кишечника высвобождаются спорозоиты, запускающие новый цикл развития паразита в результате эндогенной инвазии. Весь цикл развития паразитов в организме одного хозяина (от проникновения до выделения во внешнюю среду) занимает 4-7 дней.

Паразитируя в эпителии кишечника, возбудители криптоспоридиоза вызывают дегенеративные изменения энтероцитов. Это сопровождается развитием синдрома мальабсорбции, замедлением всасывания воды и электролитов, угнетением ферментативной деятельности кишечника, что находит клиническое выражение в возникновении профузного водянистого поноса. При криптоспоридиозе также возможно поражение эпителия глотки, гортани, пищевода, желудка, толстой кишки, а при аспирации рвотных масс – трахеи и бронхов.

При тяжелом течении криптоспоридиоза отмечается гематогенное распространение криптоспоридий в различные внутренние органы. При нормально функционирующих защитных механизмах циклическое развитие криптоспоридий в организме быстро подавляется и проявления криптоспоридиоза купируются. У иммунокомпрометированных лиц персистирование инфекции в организме может происходить неопределенно долго, что обусловливает хроническое течение криптоспоридиоза при отсутствии повторного заражения.

Симптомы криптоспоридиоза

Длительность инкубационного периода при криптоспоридиозе в среднем составляет 4-14 дней. Характер клинических проявлений и тяжесть течения инфекции зависит от исходного иммунного статуса пациента. У лиц с нормальным иммунитетом обычно развивается гастроинтестинальная форма криптоспоридиоза; у пациентов с иммунодефицитом нередко возникает бронхолегочная (респираторная) форма инфекции, а также диссеминация в другие органы.

В типичных случаях криптоспоридиоз протекает в форме острого гастроэнтерита или энтерита. Наиболее характерными проявлениями служат профузная водянистая («холероподобная») диарея, схваткообразные боли в мезогастрии, тошнота, повторная рвота. Стул водянистый, обильный, частый (от 5-10 до 20 и более раз в сутки), со зловонным запахом. Признаки дегидратации могут быть выражены в различной степени: от чувства жажды и сухости кожи до снижения тургора тканей и тонических судорог. Возможно повышение температуры до субфебрильных или фебрильных показателей. У пациентов с нормальной иммунной системой диарейный синдром продолжается 5-12 дней, после чего проявления криптоспоридиоза купируются, и наступает выздоровление.

Течение криптоспоридиоза у больных с иммунодефицитами (врожденной гипогаммаглобулинемией, получающих иммуносупрессивную терапию, перенесших трансплантацию органов, больных ВИЧ/СПИДом и т. п.) более тяжелое и длительное. При гастроинтестинальной форме криптоспоридиоза токсико-инфекционный и диарейный синдромы, признаки дегидратации выражены значительнее. Примерно у 60% пациентов кишечная инфекция длится 4 и более месяцев.

Из внекишечных форм криптоспоридиоза обычно встречается поражение респираторного тракта, желчевыводящих путей, редко — поджелудочной железы. Респираторный (бронхолегочный) криптоспоридиоз сопровождается одышкой, кашлем со скудной мокротой слизистого характера, дыхательной недостаточностью, лихорадкой, лимфаденитом. У больных СПИДом часто возникает криптоспоридиозная пневмония, приводящая к летальному исходу. При поражении желчных путей развивается холецистит, склерозирующий холангит или гепатит. Больных беспокоит лихорадка, тошнота, боль в правом подреберье, желтуха, диарея.

Диагностика и лечение криптоспоридиоза

Дифференциальная диагностика острых кишечных инфекций и подтверждение криптоспоридиоза основано на обнаружении ооцист возбудителя в испражнениях. С этой целью применяются методы окрашивания мазков фекалий по Цилю-Нильсену, Романовскому-Гимзе, Кестеру. Возможно обнаружение антигена криптоспоридий в кале методами ИФА, РЛА, ПЦР, а также в крови с помощью иммунофлюоресцентного или иммуноферментного анализа.

При бронхолегочной форме криптоспоридиоза проводится бронхоскопия. Эндоскопически обнаруживаются признаки трахеита и бронхита; в полученном материале (мокроте, аспирате трахеи и бронхов, биоптате бронхов) выявляются ооцисты криптоспоридий. Рентгенологическое исследование легких позволяет увидеть картину двухсторонней интерстициальной пневмонии. Для подтверждения криптоспоридиоза желчных путей прибегают к чрескожной пункции желчного пузыря и внутрипеченочных желчных протоков.

Большинство инфекционистов считает, что лица с нормальной иммунной системой, легким или среднетяжелым течением инфекции не нуждаются в специальном лечении криптоспоридиоза. Для купирования клинических проявлений достаточно назначения диеты, оральной регидратации, ферментов, антидиарейных средств. В тяжелых случаях, в т. ч. иммунокомпрометированным лицам, необходимо назначение антибактериальных препаратов группы макролидов, фуразолидона, метронидазола, пириметамина, спирамицина и др.; проведение коррекции водно-электролитного состояния с помощью инфузий водно-солевых растворов.

Прогноз и профилактика криптоспоридиоза

У иммунокомпетентных лиц криптоспоридиоз протекает в легкой или среднетяжелой форме и обычно заканчивается самопроизвольным выздоровлением. Наибольшую опасность криптоспоридиоз представляет для детей до 2-х лет, пациентов с иммунодефицитными состояниями и получающих длительную иммуносупрессивную терапию. Предотвратить или минимизировать риск заражения криптоспоридиозом позволит обеззараживание сточных вод, кипячение водопроводной воды, установка дополнительных фильтров для очистки воды, санитарное просвещение, соблюдение противоэпидемического режима в детских и лечебных учреждениях, а также мер личной гигиены.

Газета «Новости медицины и фармации» 17 (386) 2011

Вернуться к номеру

Криптоспоридиоз: диагностика и интерпретация результатов исследования

Авторы: В.С. Шулежко, врач-лаборант клиники «Медиком»; В.Г. Снисаренко, гастроэнтеролог клиники «Медиком», г. Кривой Рог

Кишечные инфекции — это одна из важных проблем современного здравоохранения. Патогенетически выделяют инвазивные и секреторные диареи. Ранее среди кишечных инфекций преимущественно были инвазивные диареи. Сейчас на первый план во всем мире выходят секреторные диареи, возбудителями которых являются:

Ознакомьтесь так же:  Видно ли туберкулез на флюорографии

— вирусы (ротавирусы, аденовирусы, астровирусы, калицинвирусы, кишечные коронавирусы);

— бактерии (холерный вибрион, энтеропатогенные и энтеротоксические эшерихии);

— простейшие (криптоспоридии, микроспоридии, балантидии, изоспоры).

Среди кишечных инфекций, вызываемых простейшими, лидирует криптоспоридиоз. Криптоспоридиоз — инфекция, вызываемая простейшими семейства Cryptosporididae, протекающая с поражением слизистых оболочек пищеварительной системы, обычно в форме гастроэнтерита, при котором возникает мальабсорбция. Возможно и бессимптомное течение инфекции.

Криптоспоридии являются облигатными паразитами, инфицирующими микроворсинки слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта и дыхательных путей животных и человека. Криптоспоридии — простейшие (Protozoa), относящиеся к подклассу кокцидий, к семейству Cryptosporididae, подтипу Apicomplexa, классу Sporozeasida, подклассу Coccidia.

В настоящее время род Cryptosporidium официально включает 6 видов: C.nasorum, инфицирующая рыб, C.serpentis, инфицирующая рептилий, C.baileyi и C.meleagrides, инфицирующие птиц, C.muris и C.parvum, инфицирующие млекопитающих. Следует подчеркнуть, что практически все случаи заболевания криптоспоридиозом у людей были вызваны C.parvum.

Цикл развития криптоспоридий является «эксклюзивным», то есть все циклы развития происходят в организме одного и того же хозяина.

Основной механизм инфицирования человека — фекально-оральный. Заражение может происходить при контакте с инфицированным человеком или животным, а также с объектами окружающей среды (чаще с водой), контаминироваными криптоспоридиями.

Водный путь распространения криптоспоридиоза, впервые описанный в 1983 г., является основным путем передачи возбудителя. Наибольшая опасность состоит в том, что большинство современных технологий не позволяют добиться очистки воды от криптоспоридий. Это связано с уникальной резистентностью ооцист к дезинфектантам, особенно к хлорированию, а также с малыми размерами ооцист, позволяющими им проходить через многие фильтры.

Лабораторная диагностика криптоспоридиоза осуществляется при помощи бактериологического, cерологического, иммунофлюоресцентного и иммуноферментного анализов, а также полимеразной цепной реакции.

На сегодняшний день наиболее доступным является бактериоскопический метод, т.е. обнаружение ооцист криптоспоридий в испражнениях. Для дифференцировки ооцист криптоспоридий от других простейших, дрожжевых грибков, а также сходных с ними по морфологии частиц, содержащихся в фекалиях, применяют метод окрашивания мазков карболфуксином по Цилю — Нильсену с последующей микроскопией с помощью иммерсионной системы микроскопа.

Ооцисты криптоспоридий окрашиваются в разные оттенки малинового цвета и имеют вид округлых образований 3–5 мкм с отчетливой оболочкой. Это отличает ооцисты от капель жироподобных веществ и гранул детрита, сходных с ними по размерам. Сопутствующая микрофлора окрашивается в голубые тона.

Клиническая картина. Спектр клинических проявлений криптоспоридиоза достаточно широк. Прежде всего он зависит от иммунного статуса пациента. В отсутствие иммунодефицита инкубационный период длится около 1 нед., затем появляется водянистый понос без примеси крови. Иногда, если инфицирование криптоспоридиями приводит к развитию клинически выраженного заболевания, присоединяются боль в животе, тошнота, потеря аппетита, лихорадка и похудание. Выздоровление наступает через 1– 2 нед. и нередко бывает спонтанным. При остром течении количество ооцист в кале очень велико.

При иммунодефиците, особенно у ВИЧ-инфицированных, понос нередко бывает хроническим, упорным, профузным и сопровождается значительными потерями воды и электролитов. Объем испражнений может составлять от 1 до 25 л/сут. Наблюдаются выраженное похудание, сильная боль в животе, истощение. При поражении желчных путей появляется боль в эпигастрии и в правом подреберье. У больных с иммунодефицитами заболевание протекает длительно и нередко сочетается с кандидозом, токсоплазмозом, цитомегаловирусной и другими бактериальными, паразитарными и вирусными инфекциями.

Эффективных препаратов для борьбы с криптоспоридиозом нет.

Пациентам без иммунодефицита антибиотики и антипротозойные препараты обычно не требуются. Единой схемы лечения криптоспоридиоза без антибиотиков нет. Таким больным в клинике «Медиком» применяют следующую тактику лечения:

— лечение должно включать возмещение потерь воды и электролитов;

— при необходимости — антидиарейные средства;

Все вышеизложенные принципы лечения криптоспоридиоза проводят на фоне лечения основного заболевания, приведшего к иммунодефициту.

В тяжелых случаях — госпитализация в инфекционные стационары.

Для профилактики требуется избегать контакта с испражнениями животных и человека, которые могут быть обсеменены ооцистами. Несмотря на то что водный путь заражения преобладает, все-таки необходимо использовать современные системы очистки воды. Повышение резистентности организма к инфекционным заболеваниям говорит о том, что такие методы профилактики, как закаливание, прием витаминов и др., не утратили свою актуальность.

Материалы и методы

За период с мая 2009 года по май 2010 года в клинике «Медиком» было проведено 889 исследований кала на наличие криптоспоридий. Выявлены ооцисты криптоспоридий в 181 случае, что составляет 20,36 %. Возрастная структура была следующей (табл. 1, рис. 1; табл. 2, рис. 2).

Всего детей за год обследовано 352, и у 70 человек выявлены ооцисты криптоспоридий, что составляет 19,9 %.

Всего взрослых за год обследовано 537, и у 111 человек выявлены ооцисты криптоспоридиоза, что составляет 20,7 %.

Сопутствующие кишечные инфекции, которые выявлены у взрослых пациентов с криптоспоридиозом:

— кандидоз кишечника выявлен у 50 взрослых (из 111 инфицированных криптоспоридиями), что составляет 45 % от общего числа инфицированных;

— дисбиоз толстого кишечника выявлен у 51 человека, что составляет 45,9 % от общего числа инфицированных криптоспоридиями;

— цисты кишечной амебы выявлены у 1 человека;

— цисты лямблий выявлены у 1 человека.

Сопутствующие кишечные инфекции, которые выявлены у детей с криптоспоридиозом:

— кандидоз кишечника выявлен у 35 детей (из 70 человек инфицированных), что составляет 50 % от общего числа инфицированных;

— дисбиоз толстого кишечника выявлен у 37 детей (из 70 человек инфицированных), что составляет 52,9 % от общего числа инфицированных;

— цисты кишечной амебы выявлены у 2 детей;

— цисты лямблий выявлены у 1 ребенка.

1. Среди современных кишечных инфекций, вызванных простейшими, криптоспоридиоз занимает ведущее место. В проведении исследований процент инфицированных от общего количества обследованных детей составляет 19,9 %, а от общего количе- ства обследованых взрослых — 20,7 %.

2. Среди детей наибольшая заболеваемость с 1-го месяца жизни и до 6 лет, умеренная заболеваемость с 7 до 12 лет, вероятно, связана:

— с еще не полностью сформированной иммунной системой;

— большой скученностью детей в садах и школах;

— недостаточным знанием и соблюдением детьми правил личной гигиены;

— частыми профилактическими осмотрами среди детей, особенно организованных.

3. У взрослых наибольшая заболеваемость в период с 31 года до 50 лет, вероятно, связана:

— с тем, что эти пациенты относятся к работоспособному населению и соответственно находятся в местах большой скученности людей;

— эти пациенты больше страдают заболеваниями желудочно-кишечного тракта, что вынуждает доктора назначать копрограмму.

4. В общем выявляемость криптоспоридиоза не зависит от времени года. Но небольшие подъемы заболеваемости как у взрослых, так и у детей наблюдаются в ноябре — декабре и в апреле, что связано с профилактическими осмотрами и сезонным обострением хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта.

5. У больных с иммунодефицитными состояниями криптоспоридиоз сочетался с кандидозом, кишечным амебиазом, лямблиозом и дисбактериозом кишечника. В этих случаях криптоспоридиоз надо расценивать как оппортунистическую инфекцию. А при излечивании основного заболевания или дисбиоза, как осложнения основного заболевания, криптоспоридии не определяются в кале.

6. Использование бактериоскопического метода по Цилю — Нильсену показало, что этот метод является эффективным и удобным в использовании для диагностики криптоспоридиоза.

Диагностика криптоспоридиоза

Анализ многочисленных литературных источников [1; 2; 4; 8] свидетельствуют о высоком интересе к проблеме криптоспоридиоза. Криптоспоридиоз – протозойная инвазия человека и животных, особенно опасная для молодняка сельскохозяйственных животных с иммунодефицитом. Инфекции желудочно-кишечного тракта, вызванные криптоспоридиями, зарегистрированы во всех регионах РФ и странах СНГ, а также на всех континентах, за исключением Антарктиды. Такое широкое распространение инвазии связано с большим количеством ее природных и синантропных резервуаров, низкой инфицирующей дозой и высокой резистентностью возбудителя к дезинфектантам и противопаразитарным препаратам. Криптоспоридии паразитируют преимущественно в кишечном тракте, но были обнаружены также в других органах, тканях и жидкостях (рвотные массы, мокрота, бронхиальная слизь).

Роль криптоспоридий в этиологии заболеваний животных в настоящее время установлена, но мало изучена [3]. Основные гистологические изменения наблюдаются в кишечнике больных животных. На слизистой оболочке отмечаются деформация ворсинок, единичные клетки слущенного эпителия, лимфоциты, гистиоциты и плазматические клетки. Криптоспоридии локализуются в просвете ворсинок, на их верхушках и боковых поверхностях, в микроворсинках эпителиального слоя тощей, подвздошной и в криптах слепой кишок [5; 6; 7]. В результате поражения микроворсинок нарушается всасывание питательных веществ, воды и электролитов, существенно страдает ферментативная деятельность кишечника.

Однако до сих пор криптоспоридиоз в ветеринарной практике почти не диагностируется и не указывается в ветеринарных отчетах. Причиной этого является неподготовленность ветеринарных специалистов и трудность диагностики ввиду микроскопического размера паразитов и частого участия в этиологии болезни наряду с другими патогенами.

Для диагностики криптоспоридиоза в настоящее время используются следующие методы: метод прямой микроскопии фекалий больных животных, окраска ооцист криптоспоридий в мазках фекалий или содержимого кишечника методом Циля – Нильсена, Романовского – Гимзы и по Граму, а также метод полимеразной цепной реакции – ПЦР. Основным методом, применяемым на практике, является паразитологический, заключающийся в обнаружении возбудителя при микроскопии материала. Как правило, криптоспоридии ищут в свежих фекалиях, из которых готовят тонкие мазки на предметных стеклах в 1–2 каплях изотонического раствора NaCl. Мазки сушат на воздухе не менее 30 мин, фиксируют смесью Никифорова 10–15 мин и снова сушат на воздухе. В дальнейшем их окрашивают различными красителями. Чаще применяют окрашивание карбол-фуксином по Цилю – Нильсену с последующим докрашиванием препаратов малахитовым зеленым. При этом ооцисты криптоспоридий приобретают ярко-красный цвет. Они имеют вид округлых образований диаметром до 5 мкм, внутри некоторых из них видны удлиненные спорозоиты. Сопутствующая микрофлора окрашивается в зеленый цвет. Капли жироподобных веществ и глыбки детрита также окрашиваются в ярко-красный цвет, но они не имеют четких контуров и какой-либо внутренней структуры.

Необходимо провести дифференциальную диагностику. Оценка делается по показателям, предложенным M. Bulgin (1983), после окраски по Граму.

  1. В поле зрения микроскопа почти чистая культура грамотрицательных мелких, толстых, с закругленными концами палочек, расположенных кучками. Ориентировочный диагноз – кишечная колиинфекция.
  2. В мазках-отпечатках преобладают грамположительные толстые, с прямоугольными концами бациллы, расположенные одиночно, парами или короткими цепочками. Ориентировочный диагноз – энтеротоксемия.
  3. При микроскопии мазков в поле зрения преобладают нейтрофильные клетки с микробами. Ориентировочный диагноз – сальмонеллез.
  4. В мазках имеются не окрашенные по Граму образования, по величине и форме напоминающие эритроциты, часть их имеет светлый ободок. Ориентировочный диагноз – криптоспоридиоз.
  5. В мазках-отпечатках содержится разнообразная микрофлора, среди которой трудно определить преобладающую. Такая картина характерна для инфекций, вызванных вирусами. Окончательно наличие эшерихиозных возбудителей определяется исследованиями патологического материала, предусмотренными методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза животных.

Для увеличения концентрации ооцист в исследуемом материале используют различные методы обогащения, чаще всего флотацию и седиментацию, так как нередко количество ооцист в фекалиях больных животных может быть настолько незначительным, что их выявление с помощью микроскопии окрашенных мазков представляет трудную задачу. В связи с этим используют методы обогащения, хорошо известные в гельминтологии. Флотационными жидкостями являются насыщенные растворы разных веществ. В качестве вспомогательного средства применяют флотацию без центрифугирования, флотацию с центрифугированием, методом седиментации.

В качестве флотационных жидкостей используют насыщенные растворы хлорида натрия (плотность раствора составляет 1,20 мг/см3), нитрата аммония (1,31 мг/см3), сахарозы (1,25 мг/см3), сульфата цинка (1,39 мг/см3), жидкость Дарлинга (1,20 мг/см3), среду Бреза (смесь насыщенных растворов сульфата магния, тиосульфата натрия и водопроводной воды в соотношении 3:3:1), смесь Павласека (хлорид цинка – 220 г, хлорид натрия – 210 г, водопроводная вода – 800 мл) и некоторые другие солевые растворы.

В последующем во избежание потерь собранных ооцист в процессе высушивания мазка и последующей его обработки рекомендуется предварительно нанести на покровное стекло небольшое количество плазмы или альбумина и высушить при комнатной температуре или в термостате при 37 °С.

Для длительного сохранения ооцист используют 2,5 % раствор бихромата калия. Через несколько дней вследствие исчезновения остаточного тела спорозоиты внутри ооцист видны более отчетливо. Материал можно хранить как при комнатной температуре, так и в холодильнике, но последнее предпочтительнее.

Перед заражением экспериментальных животных обязательно нужно проводить биопробу на мышах. Для постановки биопроб необходимо скормить небольшие порции фекалий новорожденным или 2–5-дневным белым мышам. При наличии в пробах ооцист криптоспоридий в фекалиях мышей через 5–8 дней будут обнаруживаться ооцисты. При вскрытии мышей в более ранний период (на 3–7-й день) в гистологических препаратах кишечника (предпочтительно использовать препараты подвздошной кишки) будут выявляться эндогенные стадии развития криптоспоридий, локализующихся в зоне щеточной каемки.

При постановке биопроб на животных можно к гомогенату фекалий добавлять антибиотики (пенициллин, стрептомицин, гентамицин), которые подавляют сопутствующую микрофлору, но не влияют на инвазивность ооцист криптоспоридий.

Количество ооцист криптоспоридий подсчитывают с помощью камеры Горяева, используемой в гематологической практике. После инкубации, стимулирующей эксцистирование ооцист, можно таким же способом подсчитывать и количество паразитов. Для количественной оценки можно также подсчитывать общее количество ооцист в окрашенном мазке, приготовленном из определенного количества фекалий (например, из 0,2 г).

Выводы

Согласно литературным данным и результатам собственных исследований, для выявления ооцист криптоспоридий наиболее приемлемым, особенно в условиях производства, является окраска мазков методом Циля – Нильсена. Для получения большой массы ооцист криптоспоридий следует использовать метод флотации с насыщенным раствором сахарозы. Культуру в последующем можно использовать при проведении экспериментальных исследований, а также для постановки биопроб на животных.

Рецензенты:

Столяров В.А., д.в.н., профессор кафедры морфологии и физиологии животных, Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева, г. Саранск;

Ерофеев В.И., д.б.н., проректор института ФГОУ ДПОС «Мордовский институт переподготовки кадров агробизнеса», профессор кафедры научно-технического прогресса и организации производства, г. Саранск.

Диагностика криптоспоридиоза

ДИАГНОСТИКА, КЛИНИКА, ЛЕЧЕНИЕ И ПРОФИЛАКТИКА

Методические рекомендации составлены сотрудниками Института цитологии АН СССР, Ленинградского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Ленинградского государственного института усовершенствования врачей имени С.М. Кирова и Ленинградского ветеринарного института.

Криптоспоридиоз — малоизученное паразитарное заболевание человека и позвоночных животных. Болезнь обычно протекает в форме гастроэнтерита, при котором нарушается всасывательная функция кишечника и нередко происходит значительное обезвоживание организма. Возможно и бессимптомное течение инфекции (инвазии). Возбудители криптоспоридиоза — паразитические простейшие (кокцидии) рода Cryptosporidium.

Криптоспоридии были впервые обнаружены в 1907 г., но их роль в этиологии кишечных инфекций животных и человека стала очевидной лишь в последние полтора десятилетия. Криптоспоридиоз поражает людей разного возраста, его течение усугубляется при нарушении иммунного статуса макроорганизма.

Этиология и патогенез

Криптоспоридии относятся к классу Sporozoa, подклассу Coccidia. Их развитие протекает по схеме гомоксенного (однохозяинного) жизненного цикла кокцидий, т.е. полное развитие паразита происходит в организме одного хозяина (человека или животного) и завершается выделением с фекалиями ооцист, устойчивых к действию неблагоприятных факторов, способных длительно сохраняться во внешней среде и заражать новых хозяев.

Ооцисты криптоспоридий диаметром 4 — 5 мкм заглатываются человеком или животным с пищей или водой. В проксимальных отделах кишечника оболочка ооцисты разрушается, при этом высвобождаются 4 червеобразных подвижных спорозоита размерами 0,8 — 1,0 x 5,0 — 5,6 мкм. Спорозоиты движутся в направлении энтероцитов кишечника, достигают зоны микроворсинок, но задерживаются на границе эпителиальной клетки, не погружаясь в ее цитоплазму. Возникает необычная локализация паразита — внутри клетки, но вне цитоплазмы (в экстрацитоплазматической паразитофорной вакуоли).

Ознакомьтесь так же:  После гриппа болят почки что делать

Сформировавшиеся трофозоиты, получая необходимые вещества через питающую органеллу эпителиальной клетки, увеличиваются в размерах и становятся меронтами, которые представлены двумя типами. Меронты 1-го типа распадаются на 6 — 8 мерозоитов (0,8 x 5 мкм), которые способны к циклическому развитию, т.е. вновь дают начало меронтам 1-го типа (бесполое размножение). Число таких циклов неизвестно, однако в результате значительно увеличивается число мерозоитов 1-го типа, часть которых дает начало меронтам 2-го типа. Последние распадаются на 4 мерозоита, способных развиваться в клетки половой фазы цикла — макр о- и микрогамонтов. Макрогамонт без метагамного деления ядра превращается в макрогамету (женскую гамету). У микрогамонта ядро делится, и каждое из 16 дочерних ядер становится ядром безжгутиковой микрогаметы (мужской гаметы). В результате копуляции гамет образуется зигота, которая покрывается оболочкой и становится ооцистой.

Процесс споруляции, т.е. формирование инвазионных спорозоитов, совершается у криптоспоридий при внутриклеточной локализации ооцисты. Это имеет большое эпидемиологическое значение, так как выделяемые во внешнюю среду ооцисты оказываются инвазионными и способными заразить нового хозяина при попадании в его пищеварительный тракт.

Весь процесс развития от попадания ооцисты в организм хозяина до выделения ооцист нового поколения у криптоспоридий млекопитающих занимает 4 — 7 дней, у человека чаще всего 5 дней. При профузной диарее во внешнюю среду выделяются ооцисты, однако не исключено, что в фекалиях могут находиться и более ранние эндогенные стадии — меронты и мерозоиты. Не все сформировавшиеся ооцисты выделяются во внешнюю среду: часть ооцист с тонкими оболочками могут вызывать аутоинвазию макроорганизма, обусловливая тем самым хроническое течение криптоспоридиоза.

Таким образом, в цикле развития криптоспоридий наблюдаются, по крайней мере, две особенности, значительно повышающие репродуктивный потенциал этого возбудителя: во-первых, способность мерозоитов 1-го типа к циклическому развитию и, во-вторых, возможность аутоинвазии организма тонкостенными ооцистами. Это объясняет длительное сохранение паразита в организме человека даже при отсутствии повторных заражений. Толстостенные ооцисты выделяются во внешнюю среду, где могут сохранять свою инвазивность в течение нескольких месяцев. Они устойчивы ко многим дезинфектантам.

Криптоспоридии млекопитающих известны как паразиты преимущественно кишечного тракта. Однако в последние годы они были выявлены также и в других органах, тканях и биологических жидкостях (мокрота, бронхиальная слизь, рвотные массы).

У телят степень поражения тонкой кишки колеблется от скопления возбудителя на отдельных участках до сплошного поражения слизистых оболочек. Наиболее часто эндогенное развитие регистрируется в терминальной части подвздошной кишки, при этом отмечаются набухание, недоразвитие и даже атрофия ворсинок. Инвазия сопровождается интенсивной инфильтрацией макрофагами, нейтрофилами и эозинофилами; в lamina propria обнаруживают массы мононуклеарных клеток. Отчетливые изменения происходят в основании крипт. Ворсинки теряют бокаловидные клетки и слипаются с другими ворсинками. Описанное поражение разных отделов кишечника приводит в результате к уменьшению поверхности всасывания слизистой оболочки. Эндогенное развитие криптоспоридий не происходит в 12-перстной кишке и в прилежащих участках тощей кишки.

У поросят развитие криптоспоридий может происходить не только в кишечнике, но также в трахее и в конъюнктиве глаза. У обезьян-резусов и жеребят инвазия зафиксирована также в протоках поджелудочной железы.

Многообразны поражения внутренних органов и тканей при криптоспоридиозе птиц. У них кроме эпителия тонкой кишки поражаются слизистые оболочки фабрициевой сумки, слепые отростки кишок и очень часто дыхательные пути, а также конъюнктива глаза, носовая полость, слюнные железы и почки.

У человека патогенез криптоспоридиоза сходен с развитием патологического процесса у животных. Образующиеся мерозоиты обеспечивают рассеивание возбудителей в кишечнике человека с поражением большого числа эпителиальных клеток.

Колонизации криптоспоридий на поверхности слизистой оболочки способствует, вероятно, гликопротеин типа лектина. Фаза присоединения к эпителиальным клеткам сопровождается повреждением микроворсинок. Тяжелая инфекция приводит к кратерообразным вдавлениям поверхностного эпителия, дегенеративным изменениям энтероцитов. В тяжелых случаях, вследствие тотального поражения микроворсинок, нарушается всасывание питательных веществ, развиваются синдром мальабсорбции и профузная водянистая диарея. Замедляется всасывание воды и электролитов, возможно, повышается их секреция из плазмы через кишечную стенку. Нарушается ферментативная деятельность кишечника.

Важной чертой патогенеза криптоспоридиоза является возможность его возникновения за счет экз о- и эндогенного заражения. В первом случае заражение начинается с попадания ооцист в организм хозяина из внешней среды, во втором случае инвазия развивается вследствие аутоинфекции.

Предложено несколько десятков методов выявления криптоспоридий, однако до сих пор нет универсального метода, который бы всегда давал однозначные результаты. Окончательный диагноз криптоспоридиоза основан на совокупности данных паразитологического (микроскопического), серологического и клинического обследований больного. Ведущим методом диагностики этой инвазии следует считать микроскопическое выявление возбудителя.

Для дифференцировки ооцист криптоспоридий от других простейших, дрожжевых и дрожжеподобных грибов, а также сходных с ними по морфологии частиц, содержащихся в фекалиях, применяются различные методы выявления кислотоустойчивых бактерий. Наиболее демонстративными и надежными являются окрашивание мазков карбол-фуксином по Цилю — Нильсену и сафранином по Кестеру с последующим изучением препаратов с помощью иммерсионной системы микроскопа. При использовании в качестве красителя аурамина для изучения мазков применяют люминесцентный микроскоп.

Приготовление мазка фекалий. На предметное стекло поместить 1 — 2 капли изотонического (0,9%) раствора хлорида натрия. На это же стекло поместить небольшой комочек свежих фекалий, смешать с изотоническим раствором до получения гомогенной массы, сделать тонкий мазок и тщательно высушить его на воздухе (не менее 30 мин.). Крупные частицы удалить скальпелем, мазок зафиксировать смесью Никифорова (смесь равных частей эфира и 96% этилового спирта) 10 — 15 мин. и тщательно высушить на воздухе.

Окрашивание карбол-фуксином по Цилю — Нильсену. Фиксированный мазок быстро провести 3 — 5 раз над пламенем горелки. Окрашивать раствором карбол-фуксина 5 — 20 мин. Состав раствора: фуксин основной — 2 г, 96% этиловый спирт — 12 мл, фенол — 5 мл, дистиллированная вода — до 100 мл (фуксин растворить в спирте, фенол — в воде, затем слить вместе). Промыть мазок водопроводной водой, обесцветить 7% (5 — 10%) раствором серной кислоты 20 — 60 с , промыть в воде и подкрасить 5 мин. 5% раствором малахитового зеленого в 10% этиловом спирте или 0,2% водным раствором метиленового синего. Промыть в воде, тщательно высушить на воздухе и исследовать под микроскопом (с иммерсией).

Результаты. Ооцисты криптоспоридий окрашиваются в разные оттенки ярко-красного цвета и имеют вид округлых образований диаметром до 5 мкм. Внутри некоторых ооцист удается рассмотреть удлиненные спорозоиты. Сопутствующая микрофлора окрашивается в зеленые тона.

Примечания. В красный цвет могут окрашиваться капли жироподобных веществ и гранулы детрита. Даже при случайном сходстве по размерам эти образования легко отличить от ооцист криптоспоридий по отсутствию у них отчетливой оболочки и какого-либо структурированного содержимого внутри. В сомнительных случаях серийные мазки следует окрасить иным методом. При необходимости можно уменьшить концентрацию малахитового зеленого (подбирается опытным путем). Окрашивание по Цилю — Нильсену можно производить и без предварительной фиксации мазков.

Данный метод считается одним из наиболее демонстративных и надежных для выявления ооцист криптоспоридий. Краска не выцветает много месяцев.

Окрашивание сафранином по Кестеру. Мазок, высушенный на воздухе, фиксировать смесью Никифорова, снова высушить на воздухе при комнатной температуре и фиксировать над пламенем горелки. Окрашивать в растворе сафранина 5 мин. (водный насыщенный раствор сафранина — 2 части, 5,6% раствор КОН — 5 частей). После споласкивания водой дифференцировать 10 с в 0,1% растворе серной кислоты, промыть в воде и окрашивать в 5% растворе малахитового зеленого (см. выше) 10 — 15 с. Промыть в воде, тщательно высушить на воздухе и исследовать под микроскопом (с иммерсией).

Результаты. Ооцисты криптоспоридий окрашиваются в бледно-розовый цвет и хорошо выделяются на зеленом фоне. Другие микроорганизмы не окрашиваются сафранином.

Примечания. Этот метод считается одним из наиболее точных при выявлении ооцист криптоспоридий, позволяя наиболее отчетливо видеть внутреннее содержимое ооцист (спорозоиты). Краска нестабильна, препараты быстро выцветают.

Окрашивание азур-эозином по Романовскому — Гимзе. Этот широко распространенный метод окрашивания мазков крови может быть успешно применен и при выявлении ооцист криптоспоридий. В ряде случаев он весьма информативен, поскольку при адекватной предварительной подготовке мазка краситель проникает внутрь ооцисты и окрашивает спорозоиты.

Мазок, фиксированный смесью Никифорова и тщательно высушенный на воздухе, быстро провести над пламенем горелки (3 — 5 быстрых движений). Окрашивать 10% раствором красителя от 10 до 30 — 45 мин. Тщательно промыть в воде (лучше в проточной водопроводной), высушить на воздухе (можно в струе холодного воздуха под феном) и исследовать под микроскопом с иммерсионной системой.

Результаты. Ооцисты криптоспоридий имеют вид неокрашенных или слабо окрашенных округлых образований диаметром до 5 мкм. Внутри некоторых ооцист удается рассмотреть бледно-голубые удлиненные и слегка изогнутые тельца (спорозоиты) с красноватыми гранулами внутри. Спорозоиты располагаются по периферии ооцисты, оставляя ее центральную часть пустой.

Примечание. Идентификация ооцист криптоспоридий затруднена в связи с тем, что другие микроорганизмы кишечника также окрашиваются азур-эозином , причем значительно интенсивнее ооцист. В связи с этим необходимо делать тонкие мазки, в которых наложение микрофлоры на ооцисты не «экранировало» бы последние от наблюдателя. Окрашенные препараты не выцветают в течение многих месяцев.

Негативное окрашивание нигрозином. Небольшое количество свежесобранных фекалий смешать непосредственно на предметном стекле с таким же объемом 1% водного раствора нигрозина до получения гомогенной и равномерно окрашенной суспензии. Мазок тщательно высушить на воздухе и исследовать под микроскопом (объектив x40, окуляр x10).

Результат. Ооцисты криптоспоридий не окрашиваются, имеют вид прозрачных округлых образований диаметром до 5 мкм, оконтуренных снаружи отчетливым черным ободком, который облегчает их идентификацию.

Примечания. Негативное окрашивание нигрозином является одним из методов быстрого скрининга исследуемого материала. Мазки, окрашенные нигрозином, можно затем фиксировать смесью Никифорова и окрасить по Цилю — Нильсену или любым другим способом.

Метод флуоресцентного окрашивания. Толстые мазки свежих фекалий высушить на воздухе, провести через раствор аурамина с фенолом, промыть водой и быстро окрасить (5 — 10 мин.) в растворе карболового фуксина. После промывания водой высушить на воздухе и исследовать с помощью флуоресцентного микроскопа (лучше с иммерсионной системой).

Результаты. Ооцисты криптоспоридий имеют вид ярко флуоресцирующих дисков, отчетливо заметных на темно-красном фоне.

Исследование материала после обогащения

Для увеличения концентрации ооцист в исследуемом материале используют различные методы обогащения, чаще всего — флотацию и седиментацию, так как нередко количество ооцист в фекалиях больного может быть настолько незначительным, что их выявление с помощью микроскопии окрашенных мазков представляет трудную задачу. В связи с этим используют методы обогащения, хорошо известные в гельминтологии. Флотационными жидкостями являются насыщенные растворы разных веществ. В качестве вспомогательного средства применяют центрифугирование исследуемого материала в этих жидкостях.

При работе с фекалиями человека рекомендуется добавлять во флотационные жидкости различные дезинфектанты (несколько капель формальдегида или раствора фенола), чтобы воспрепятствовать росту грибов и других микроорганизмов.

В качестве флотационных жидкостей используют насыщенные

растворы хлорида натрия или сахарозы (насыщение достигается, когда

соответствующие вещества перестают растворяться в горячей воде при

перемешивании или встряхивании), а также насыщенный раствор

сульфата цинка (331 г ZnSO x 7H O растворить в 1 л водопроводной

воды; для исследования свежесобранных фекалий рекомендуется

доводить плотность раствора соли до 1,18 г/мл, а при исследовании

формалинизированного образца фекалий — до 1,2 г/мл). Для флотации

используют также среду Бреза (смесь насыщенных растворов сульфата

магния и тиосульфата натрия и водопроводной воды в соотношении

3:3:1), смесь Павласека (хлорид цинка — 220 г, хлорид натрия — 210

г , водопроводная вода — 800 мл) и некоторые другие солевые

Флотация без центрифугирования. Небольшое количество тщательно размельченных фекалий смешать с 4 — 5 объемами флотационной жидкости до получения гомогенной массы. Полученную суспензию профильтровать через марлю или мелкоячеистую сеточку, собирая фильтрат через воронку в пробирку или узкий цилиндр объемом 15 — 20 мл. Жидкость в сосуде должна доходить до его верхнего края. На этот сосуд поместить покровное стекло так, чтобы оно контактировало с поверхностью жидкости. Через 20 мин. покровное стекло снимают быстрым движением вверх. Ооцисты криптоспоридий при этом остаются на нижней поверхности стекла. Мазок высушить на воздухе и окрасить одним из описанных выше способов.

Примечания. Во избежание потери собранных ооцист в процессе высушивания мазка и последующей его обработки рекомендуется предварительно нанести на покровное стекло небольшое количество плазмы или альбумина и высушить при комнатной температуре или в термостате при 37 °C.

Флотация с центрифугированием. Центрифугирование ускоряет процесс флотации ооцист, а также позволяет отмывать фекалии, сводя до минимума загрязнение препарата жиром или детритом. При отмывании фекалий их разбавляют водой, а не флотационной жидкостью, и процеживают в центрифужную пробирку объемом 15 мл. Исследуемый материал необходимо центрифугировать в течение 1 — 2 мин. при 2 — 3 тыс. об . / м ин. или 3 — 4 мин. при 1500 об./мин. После первого (отмывочного) центрифугирования супернатат удалить, при этом объем оставшегося осадка не должен превышать 1 мл. Добавить в пробирку флотационную жидкость на половину ее объема и ресуспендировать в ней осадок с помощью пипетки с резиновым баллоном или стеклянной палочки. Затем долить флотационную жидкость до верхнего края пробирки и центрифугировать повторно при том же режиме; в результате ооцисты сконцентрируются в поверхностной пленке жидкости. Материал с этой пленки собрать металлической петлей или стеклянным капилляром, нанести на предметное стекло и приготовить равномерный мазок, который высушить на воздухе, фиксировать смесью Никифорова и окрасить соответствующим методом (см. ранее).

Альтернативная модификация. Материал, собранный с поверхностной пленки после второго центрифугирования (объем этого материала не должен превышать 1 — 2 мл), смешать с 10 мл воды, после чего центрифугировать 2 — 5 мин. с большой скоростью (2,5 — 3,5 тыс. об . / м ин.). Ооцисты криптоспоридий в этом случае осядут на дно. Из образовавшегося осадка делают мазок.

Альтернативная модификация. 5 г фекалий суспендировать в 15 — 20 мл забуференного фосфатом изотонического раствора pH 7,2. Профильтровать через марлю в центрифужную пробирку, центрифугировать 10 мин. при 2 тыс. об . / м ин., осадок фекального гомогената вновь ресуспендировать в изотоническом растворе и повторно центрифугировать при том же режиме. Полученный осадок смешать с флотационной жидкостью (45 г сахарозы в 355 мл воды) и центрифугировать 10 мин. при 2 тыс. об . / м ин., после чего собрать материал с поверхностной пленки, нанести на предметное стекло, окрасить и полученный мазок исследовать под микроскопом.

Методы седиментации. Обычно применяют седиментацию эфиром, для чего 0,5 — 1,0 г фекалий необходимо смешать с 10 — 12 мл изотонического раствора хлорида натрия. Тщательно перемешанную суспензию процедить через 2 слоя марли в центрифужную пробирку объемом 15 мл. Осадок дважды промыть изотоническим раствором при центрифугировании, затем тщательно суспендировать в 10 мл 10% раствора формалина, добавить 3 мл эфира и тщательно перемешать, предварительно закрыв пробирку пробкой. Полученную смесь центрифугировать в течение 2 мин. при 1 тыс. об . / м ин. Эфир, поверхностный детрит и формалин слить, а из оставшегося на дне пробирки осадка сделать мазки и окрасить одним из описанных ранее методов.

Ознакомьтесь так же:  Как долго проходит кашель после пневмонии

При модифицированном методе эфирной седиментации 0,5 мл жидких фекалий смешать с 3 мл 10% раствора формалина и размешать до получения гомогенной суспензии. Добавить 30 мл этилового эфира и тщательно перемешать путем встряхивания, затем добавить 15 мл 10% раствора формалина, перемешать и процедить полученную смесь через марлю в центрифужную пробирку. Конец пипетки с резиновым баллоном осторожно (не касаясь стенок пробирки) опустить ниже слоев эфира и детрита, отсосать нижний столбик жидкости и перенести ее в другую пробирку. Новую пробирку долить 10% раствором формалина и центрифугировать в течение 5 — 10 мин. при 3 тыс. об . / м ин. (длительность центрифугирования пропорциональна вязкости раствора). Из осадка приготовить мазки и окрасить их одним из обычных способов.

Для длительного сохранения ооцист используют 2,5% раствор бихромата калия. Через несколько дней вследствие исчезновения остаточного тела спорозоиты внутри ооцист видны более отчетливо. Материал можно хранить как при комнатной температуре, так и в холодильнике, но последнее предпочтительнее.

Осадок ооцист можно хранить и в изотоническом растворе хлорида натрия при 4 °C. Следует иметь в виду, что в процессе хранения ооцист их жизнеспособность и инвазивность постепенно снижаются. Поэтому адекватные результаты в опытах по экспериментальному заражению животных могут быть получены при использовании ооцист, хранившихся не более 1 — 2 месяцев.

Биопробы на мышах. Для постановки биопроб необходимо скормить небольшие порции фекалий новорожденным или 2 — 5-дневным белым мышам. При наличии в пробах ооцист криптоспоридий в фекалиях мышей через 5 — 8 дней будут обнаруживаться ооцисты. При вскрытии мышей в более ранний период (оптимально — на 3 — 7-й дни) в гистологических препаратах кишечника (предпочтительно в препаратах подвздошной кишки) будут выявляться эндогенные стадии развития криптоспоридий, локализующиеся в зоне щеточной каемки.

При постановке биопроб на животных можно к гомогенату фекалий добавлять антибиотики (пенициллин, стрептомицин, гентамицин), которые подавляют сопутствующую микрофлору, но не влияют на инвазивность ооцист криптоспоридий.

Количество ооцист криптоспоридий подсчитывают с помощью камеры Горяева, используемой в гематологической практике. После инкубации, стимулирующей эксцистирование ооцист, можно таким же способом подсчитать и количество спорозоитов.

Для количественных определений можно также подсчитывать общее количество ооцист в окрашенном мазке, приготовленном из определенного количества фекалий (например, из 0,2 г).

Инкубационный период при криптоспоридиозе продолжается 5 — 7 дней, но возможно его укорочение до 3 дней (минимальный срок развития паразита в макроорганизме). У большинства инвазированных криптоспоридиями больных развивается острый или хронический диарейный синдром, реже — респираторная или смешанная форма заболевания.

Основные клинические проявления кишечной формы криптоспоридиоза — жидкий водянистый стул, повышенная температура, слабость. Тошнота и рвота наблюдаются у 30 — 40% больных. У лиц с нормальной иммунной системой кишечный криптоспоридиоз чаще протекает субклинически или как «здоровое носительство» возбудителя. Оба вида инфицирования криптоспоридиями нередко отмечаются у лиц, выезжающих за рубеж в командировки или туристические поездки. Нарушение привычного режима и характера питания, несоблюдение правил личной гигиены в дорожных условиях приводят к развитию так называемой «диареи путешественников», причиной которой могут быть лямблии, криптоспоридии и другие простейшие, а также различные бактерии и вирусы.

Если инфицирование криптоспоридиями приводит к развитию клинически выраженного заболевания, у иммунокомпетентных лиц возникают следующие симптомы: озноб, лихорадка, слабость, анорексия, тошнота, рвота и водянистый жидкий стул. Как правило, частота стула за сутки не превышает 10 раз. Жидкий стул появляется на 1-й, реже — на 2-й день болезни; больной отмечает ноющие боли в верхней половине живота. Продолжительность этих симптомов в большинстве случаев не превышает 2 недель, и болезнь заканчивается полным спонтанным выздоровлением.

У больных с иммунодефицитами заболевание протекает тяжело и длительно. У них на фоне сравнительно высокой температуры отмечается прогрессирующая диарея перемежающегося или постоянного типа с большой потерей жидкости (от 1 до 12 л за сутки), что требует проведения интенсивной регидратационной терапии. Длительность болезни колеблется в пределах 6 — 8 нед. Отмечается прогрессирующее похудание больного.

У таких больных криптоспоридиоз передается от человека к человеку и нередко сочетается с кандидозом, пневмоцистной пневмонией, токсоплазмозом, цитомегаловирусной и другими бактериальными и вирусными инфекциями. Двойные и множественные инфекции приобретают злокачественное течение и вскоре приводят к резкому истощению и гибели больных.

Бронхолегочный ( респираторный ) криптоспоридиоз характеризуется лихорадкой, лимфаденопатией, хроническим кашлем со скудной слизистой (реже — слизисто-гнойной) мокротой, одышкой и цианозом. При рентгенологическом исследовании установлено диффузное поражение трахеи, бронхов, бронхиол и даже альвеол. В мокроте можно обнаружить ооцисты криптоспоридий. При биопсии выявляется метаплазия поверхностных эпителиальных клеток бронхов. Описана также двусторонняя интерстициальная пневмония, обусловленная криптоспоридиями. Ооцисты при этом выявляются в альвеолярных макрофагах. Все описанные случаи респираторного криптоспоридиоза завершились смертью больных, несмотря на массивную и разностороннюю химиотерапию.

Эффективных средств этиотропной терапии для лечения больных криптоспоридиозом пока не найдено. У иммунокомпетентных больных нередки случаи спонтанного выздоровления без какой-либо медикаментозной терапии. Полноценная четко усваиваемая пища без грубой клетчатки (стол N 4 по Певзнеру), пероральный прием большого количества жидкости достаточны для излечения больных с легкой или даже среднетяжелой формой криптоспоридиоза. Однако в связи с тем, что у лиц с иммунодефицитами любой природы заболевание приобретает затяжное прогрессирующее течение, этой категории больных необходима с первых дней болезни превентивная медикаментозная терапия. Многие исследователи рекомендуют использовать для лечения больных фуразолидон. В ветеринарии при криптоспоридиозной диарее телят с успехом применяют полимиксин с фуразолидоном на протяжении 5 — 6 дней. Следует отметить, что лечение полимиксином больных криптоспоридиозом людей не дает эффекта.

Учитывая нередкое сочетание криптоспоридиоза с лямблиозом или кампилобактериозом, целесообразным можно считать назначение метронидазола (трихопола), тинидазола (фазижина), гентамицина и других препаратов, эффективных при данных инфекциях и инвазиях.

В качестве средств патогенетической терапии больных криптоспоридиозом, развившимся на фоне иммунодефицита, следует назначать иммуностимуляторы (тимозин, тимарин, тималин и др.), метилурацил (метацил), пентоксил и другие препараты. Широко применяется иммунозаместительная терапия — переливания взвеси лейкоцитов и тромбоцитов, введение иммуноглобулинов.

Решающее значение при лечении больных с выраженным диарейным синдромом имеет патогенетическая терапия, направленная на восстановление водно-электролитного обмена. Лечение проводят с первых часов заболевания, а его интенсивность определяется тяжестью дегидратации больного. При легкой степени обезвоживания у больного отмечают умеренную жажду, эластичность кожи и влажность слизистых оболочек полости рта не нарушена, глаза нормальные, слезная жидкость имеется, пульс и диурез нормальные. При дегидратации средней тяжести (потеря 6 — 9% жидкости) больной беспокоен или заторможен, жажда очень выражена, глаза и большой родничок у маленьких детей западают, тургор кожи снижен, слизистые оболочки сухие, слезная жидкость отсутствует, пульс быстрый слабого наполнения, диурез отсутствует в течение нескольких часов. При 1-й и 2-й степени обезвоживания применяют пероральную регидратацию стандартными глюкозо-солевыми растворами, рекомендованными Всемирной организацией здравоохранения. Гидрокарбонатный раствор включает хлорид натрия — 3,5 г, гидрокарбонат натрия — 2,5 г, хлорид калия — 1,5 г, глюкозу — 20 г, воду кипяченую — 1 л. В состав цитратного раствора вместо 2,5 г гидрокарбоната входит 2,9 г цитрата натрия (смесь солей, используемых для приготовления последнего раствора, более стабильна, поэтому ее можно хранить в течение более продолжительного времени). Можно использовать также коммерческий препарат «Регидрон» (хлорид натрия — 3,5 г, цитрат натрия — 2,9 г, хлорид калия — 2,5 г, глюкоза — 10 г, вода кипяченая — 1 л), выпущенный финской фирмой «Орион диагностика». Применение этих растворов разрешено в нашей стране Приказами Министерства здравоохранения СССР N 307 от 18.03.1985 и N 998 от 28.07.1986.

Вначале проводят первичную регидратацию (обычно в течение первых 4 — 6 ч, в зависимости от степени обезвоживания) для ликвидации развившегося водно-солевого дефицита. Затем осуществляют поддерживающую регидратацию для возмещения продолжающейся потери воды и солей в тех случаях, когда в течение какого-то времени сохраняется диарейный синдром или рвота. Объем раствора для первичной регидратации зависит от массы больного и определяется по специальной формуле или с помощью таблицы. При невозможности взвесить больного ориентировочный объем необходимой жидкости для маленьких детей можно установить на основании возраста ребенка (табл.).

ОРИЕНТИРОВОЧНЫЙ ОБЪЕМ (В МЛ) ГЛЮКОЗО-СОЛЕВЫХ РАСТВОРОВ

ДЛЯ ПЕРВИЧНОЙ ОРАЛЬНОЙ РЕГИДРАТАЦИИ

│ Масса │ Возраст ребенка │ Степень обезвоживания │

│ │ │ легкая │ средней тяжести │

│ 3 — 4 │ 1 — 2 мес. │ 120 — 200 │ 300 — 400 │

│ 5 — 6 │ 3 — 4 мес. │ 200 — 300 │ 500 — 600 │

│ 7 — 8 │ 6 — 9 мес. │ 300 — 400 │ 700 — 800 │

│ 9 — 10 │ 1 — 2 года │ 400 — 500 │ 900 — 1000 │

│ 11 — 12 │ 2 — 3 года │ 500 — 600 │ 1000 — 1100 │

При легкой степени обезвоживания первичную регидратацию проводят в течение 4 ч, при средней тяжести — в течение 6 ч. Затем осматривают больного и, если признаки обезвоживания ликвидированы, переходят к поддерживающей терапии для компенсации дополнительных потерь жидкости при продолжающемся диарейном синдроме. Если же признаки обезвоживания сохраняются или даже усиливаются, необходимо переходить на внутривенное введение жидкости (как при 3-й степени дегидратации, т.е. при потере 10% и более жидкости).

При тяжелых формах криптоспоридиозной диареи производят капельное или струйное введение солевых растворов (квартасоль, растворы 5:4:1 и другие, используемые при лечении тяжелых токсикоинфекций и холеры). Для приготовления раствора 5:4:1 в 1 л апирогенной бидистиллированной воды растворяют 5 г хлорида натрия, 4 г бикарбоната натрия и 1 г хлорида калия. Широко используемый раствор «квартасоль» содержит в 1 л апирогенной воды 4,75 г хлорида натрия, 2,6 г ацетата натрия, 1,5 г хлорида калия и 1 г гидрокарбоната натрия. Растворы вводят подогретыми до 38 — 40 °C в объеме, соответствующем потерям жидкости, вычисленным по степени обезвоживания, массе тела и показателям гемодинамики.

Больных с респираторной формой криптоспоридиоза, которая нередко сочетается с пневмоцистной пневмонией, а также кандидозной, пневмококковой и другими инфекциями, лечат антибиотиками широкого спектра действия, а также амфотерицином B и производными имидазола (миконазол, кетоконазол и др.).

Правильная тактика лечения с учетом возможности наличия ассоциированной инфекции у больных с иммунодефицитами может увеличить продолжительность жизни и даже способствовать их выздоровлению.

Эпидемиология и профилактика

К настоящему времени описано около 30 видов хозяев криптоспоридий, которых можно условно разделить на две группы по восприимчивости к возбудителю. Хозяева одной группы остаются клинически здоровыми после заражения; к ним относятся мелкие лабораторные животные (мыши, крысы, морские свинки, кролики), кошки, собаки, цыплята, гуси и др. Другую группу составляют животные, у которых инвазия протекает с выраженной клинической картиной (телята, ягнята, поросята, козлята, олени, обезьяны, индюки и др.). Разумеется, данное деление на группы весьма условно. Человек относится ко второй группе.

Криптоспоридии не обладают узкой специфичностью, о чем свидетельствует сравнительная легкость заражения телят от ягнят, поросят, крыс и мышей. Ооцистами криптоспоридий, выделенными от людей, удается заражать ягнят, поросят и телят, а сам человек может заразиться от телят с последующим развитием клинически выраженной болезни. Животные не являются единственным источником заражения человека. Доказана передача возбудителей от человека к человеку фекально-оральным механизмом — как в пределах семьи, так и в больницах, где обслуживающий персонал может не только заражаться от больных, но и передавать инвазию другим больным.

Особую группу риска при криптоспоридиозе составляют дети в возрасте до 10 лет, на долю которых приходится до 50% случаев этой инвазии. Чаще криптоспоридиоз регистрируется как спорадические случаи, хотя за рубежом за последние 3 года (1984 — 1986 гг.) описаны многочисленные вспышки криптоспоридиоза в детских дошкольных учреждениях. Эти вспышки часто протекали с присоединением шигеллеза Зонне и кампилобактериоза.

Факторами передачи криптоспоридий могут быть продукты питания (колбаса, сырое молоко) или вода, загрязненные ооцистами.

Многочисленные данные показывают, что телята (главный резервуар криптоспоридий) заражаются уже в самые первые дни после рождения. Об этом свидетельствует практически полное совпадение скорости размножения паразита в организме (3 — 5 дней) и сроков появления первых клинических признаков заболевания (3 — 5-е сутки после рождения теленка). Как правило, источники заражения новорожденных телят криптоспоридиями остаются невыясненными, так как у коров к достижению зрелого (репродуктивного) возраста ооцистоносительство прекращается. По-видимому, телята заражаются ооцистами, длительно сохраняющимися в жизнеспособном и инвазивном состоянии в загрязненных помещениях животноводческих комплексов.

Персистирование ооцист криптоспоридий в указанных помещениях обусловлено исключительно высокой продуктивностью паразита во время эндогенного развития и значительной устойчивостью ооцист во внешней среде. Так, в 1 г фекалий телят может содержаться от 1 до 74 млн. ооцист, которые сохраняют свои инвазивные свойства во внешней среде до 1 года (от 4 до 16 мес.). Определенную роль в распространении криптоспоридиоза могут играть также дикие и синантропные грызуны.

Предупреждение криптоспоридиоза обеспечивается прежде всего воздействием на ооцисты в животноводческих и птицеводческих комплексах, а также в больницах и детских учреждениях.

Как уже отмечалось выше, ооцисты криптоспоридий весьма устойчивы к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды и различным химическим веществам. Ооцисты сохраняют жизнеспособность в течение 18 ч в 3% растворе крезоловой кислоты, в 5% растворе гипохлорита натрия, в 0,02 М растворе гидроокиси натрия и в 4% растворе йодоформа, но погибают после такой экспозиции в 10% растворе формалина или 5% растворе аммиака. Выраженный обеззараживающий эффект может быть получен путем тщательной уборки помещений животноводческих ферм, включая механическое удаление навоза. Режим дезинфекции для предупреждения распространения криптоспоридиоза в больницах, детских учреждениях и домашних условиях разработан еще недостаточно.

Важным мероприятием, направленным на предупреждение криптоспоридиоза, является целенаправленное исследование материала от больных с острыми кишечными инфекциями, от здоровых лиц с высоким риском заражения (контакт с больными, работа на животноводческих и птицеводческих комплексах и т.д.) на присутствие ооцист в фекалиях. За лицами, у которых обнаружены ооцисты, должно быть установлено медицинское наблюдение. В отношении этих людей проводят такие же мероприятия, как при лямблиозе, энтеробиозе и других инвазиях.

Бейер Т.В. Криптоспоридиоз животных. — Ветеринария, 1986, N 10, с. 42 — 45.

Горбов Ю.К., Цыряпкин Б.С. Криптоспоридиоз животных. — Тезисы докладов научно-производственной конференции по актуальным вопросам ветеринарии. Горький, 1984, с. 88 — 90.

Прокопич Я. Криптоспоридиоз — новый зооноз. — Мед . п аразитол. и паразитарн. болезни, 1983, N 5, с. 50 — 52.

Стрелкова М.Р., Чайка Н.А. Применение оральной регидратации при острых кишечных инфекциях у детей. Методические рекомендации. Л., 1986, 14 с.

Jirous J. et al. Случай криптоспоридиоза у человека в ЧССР. — Журн. гигиены, эпидемиол., микробиол. и иммунол., 1986, т. 30, N 1, с. 103 — 105.

Чайка Н.А., Бейер Т.В. Криптоспоридиоз. Библиографический указатель отечественной и зарубежной литературы за 1976 — 1986 гг. Л., 1987. — 16 с.

РЕАГЕНТОВ, ПОСУДЫ И ОБОРУДОВАНИЯ, НЕОБХОДИМЫХ

ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ НА ООЦИСТЫ КРИПТОСПОРИДИЙ

Антибиотики (пенициллин, Фенол

стрептомицин, гентамицин) Формалин

Азур-эозин Фуксин карболовый

Аурамин Цинка сульфат

Дистиллированная вода Цинка хлорид

Изотонический раствор хлорида Эфир этиловый

натрия Микроскоп биологический

Калия бихромат бинокулярный

Калия перманганат Микроскоп люминесцентный

Кислота соляная Холодильник

Кислота серная Спиртовка

концентрированная Стекла предметные

Малахитовый зеленый Стекла покровные

Метиленовый синий Пробирки бактериологические