Серологическое исследование крови на бруцеллез

Реакция Хеддельсона

Серологическое исследование: Реакция Хеддельсона


Реакция Хеддельсона —
один из методов экспресс-диагностики бруцеллеза. Достаточно проста в проведении, не занимает много времени, не требует особых условий. Может применяться с первых дней заболевания.

Для проведения анализа берется кровь из пальца исследуемого, капельки сыворотки крови помещаются на предметное стекло в количестве четырех штук. Далее в исследуемый материал капается бруцеллезный диагностикум, кроме последней капли — это контрольная, в нее добавляется физраствор. В случае появления хлопьев — реакция агглютинации на стекле считается положительной.

Что такое бруцеллез?

Бруцеллез — повсеместно распространенная инфекция, источником заражения которой являются домашние животные. Это заболевание отличается многообразием путей передачи, склонностью к хроническому течению и способностью поражать многие органы и системы человека.

В сельских хозяйствах основным способом передачи является контактный и аэрозольный. Заражение, в основном, происходит во время ухода за мелким и крупнорогатым скотом, свиньями и оленями (стрижка, уборка сараев, прием родов и т.д.). Жители городов чаще заражаются алиментарным путем при употреблении в пищу козьего или коровьего молока, не прошедшего этап кипячения, а также брынзы и плохо проваренного мяса зараженных животных.

Бруцеллез протекает с периодами повышения температуры до критических цифр, однако состояние больного в эти моменты особо не страдает. Лихорадка принимает волнообразный характер, сопровождается болями в мышцах и суставах. Могут поражаться нервная и сердечно-сосудистая системы. Опасен бруцеллез развитием выкидышей на ранних сроках и формированием женского и мужского бесплодия. При отсутствии лечения заболевание может привести к инвалидности.

Кому и когда специалист может назначить обследование?

Реакция Хеддельсона проводится людям в местах вспышек бруцеллеза для выявления зараженного контингента.

Недостаток этого метода в большом проценте ложноположительных результатов. Однако простота и скорость методики позволяют выявить людей, которых необходимо направить на более тщательное исследование.

Расшифровка данных анализа

Реакция Хеддельсона — анализ качественный. Результат может быть положительным или отрицательным.

Если агглютинация появилась в трех или двух каплях из четырех исследуемых — результат считается положительным. Только в одной — сомнительный результат.

Агглютинация во всех каплях отсутствует- реакция отрицательная, бруцеллез не обнаружен.

При положительных и сомнительных результатах пациенты должны быть направлены на другие исследования, которые окончательно подтвердят или опровергнут наличие бруцелл в организме.

Стоимость проведения анализа: руб.

Вопросы и ответы

Анализ типирования Вопрос: Здравствуйте. Я из г.Сочи. Хотел узнать у вас можно получить анализ типирования. данные HLA групп В и DR. Сколько это стоит? И какой срок исполнения.Спасибо!

Ответ: Здравствуйте! Стоимость услуги «Молекулярно-генетическое исследование: HLA-типирование 1 пациента (II класс) (по локусам DRB1, DQA1, DQB1)» -5500 руб. Срок выполнения до 10 рабочих дней.

График работы Вопрос: Можно ли сдать :копрограмму, общий анализ крови и узи брюшной полости 5 января 2019? В какое время?

Ответ: Здравствуйте! Анализы Вы можете сдать с 7.30 до 14.00 без предварительной записи. На УЗИ Вам необходимо записаться по телефону 8-800-770-07-34

Россельхознадзор / Форум

федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору

Зарегистрирован: 17/12/2015 08:41:34
Сообщений: 10
Оффлайн

Добрый день!
Опишу ситуацию.
Содержу коз в количестве 15гол, на участке, безвыпасно, траву не кошу, животные только на сене, контактов у моих животных с другими МРС не было, мои животные доступ за пределы участка не имеют. При проведении планового исследования на бруцеллез в 2014г все результаты отрицательные, после этого ввоза животных в мое хозяйство не было.
Весной 2015 года планового исследования не было, а провели его в октябре 2015г(возможно это был эпизоотический мониторинг) При этом в нашем населенном пункте выявлено четыре положительнореагирующих животных МРС. В том числе мое животное, козочка, рожденная в моем хозяйстве в 2014 г. Мать ее отр, козел, ее крывший — отр, пятеро коз, живших с ней в одной стайке на протяжении более 1 года, — отр. Результаты РА 1:200, Рид положит. Мы с муже уже тоже сдали на бруцеллез — отриц.
В нашей местности до этого ни разу за обозримые года не было выявлено ни одного случая заболевания бруцеллезом.
Козочка на момент исследования была беременна со сроком 2 мес. Помимо этого до беременности была обезрожена, но пошло инфицирование пазух, после проведения антибиотикотерапии состояние улучшилось. Но возможно очаг инфекции в пазухах остался., так как коза опять стала пугливой и голову трогать не дает.
После выявления, козочка была изолирована. Все оставшееся поголовье повторно исследовано, все отрицательно, вчера сделали уже второй забор крови.
Провести повторное исследование положительно среагировавщего животного мне отказали. Выписали предписание на убой.
Я за свои средства провела исследование цельной крови в ПЦР, результат отрицательный.
Имели ли право мне отказать в повторном исследовании животного? При этом, диагноз установила лаборатория. Никто из врачей не выезжал в мое хозяйство, не проводил исследование ситуации. Все мои попытки провести повторное исследование встретили категорический отказ. Более того передать всю ругань, что я услышала в свой адрес, невозможно, врач эпизоотолог совершенно неадекватна.

Других положительно реагирующих животных уже забили, вскрытие ветсанэкспертом никаких изменений не выявило, пат материал на исследование, естесственно, никто не отправлял. При этом все замалчивается, скрывается, никто ничего не знает. Даже о том, что пришли результаты повторных анализов мне не сообщили.

Может ли это быть ложноположительная реакция в связи с беременностью, с воспалительным процессом?

Какие действия мне можно предпринять для установления диагноза?

Зарегистрирован: 19/03/2014 14:43:40
Сообщений: 544
Оффлайн

Аннв М. wrote: Добрый день!
Опишу ситуацию.
Содержу коз в количестве 15гол, на участке, безвыпасно, траву не кошу, животные только на сене, контактов у моих животных с другими МРС не было, мои животные доступ за пределы участка не имеют. При проведении планового исследования на бруцеллез в 2014г все результаты отрицательные, после этого ввоза животных в мое хозяйство не было.
Весной 2015 года планового исследования не было, а провели его в октябре 2015г(возможно это был эпизоотический мониторинг) При этом в нашем населенном пункте выявлено четыре положительнореагирующих животных МРС. В том числе мое животное, козочка, рожденная в моем хозяйстве в 2014 г. Мать ее отр, козел, ее крывший — отр, пятеро коз, живших с ней в одной стайке на протяжении более 1 года, — отр. Результаты РА 1:200, Рид положит. Мы с муже уже тоже сдали на бруцеллез — отриц.
В нашей местности до этого ни разу за обозримые года не было выявлено ни одного случая заболевания бруцеллезом.
Козочка на момент исследования была беременна со сроком 2 мес. Помимо этого до беременности была обезрожена, но пошло инфицирование пазух, после проведения антибиотикотерапии состояние улучшилось. Но возможно очаг инфекции в пазухах остался., так как коза опять стала пугливой и голову трогать не дает.
После выявления, козочка была изолирована. Все оставшееся поголовье повторно исследовано, все отрицательно, вчера сделали уже второй забор крови.
Провести повторное исследование положительно среагировавщего животного мне отказали. Выписали предписание на убой.
Я за свои средства провела исследование цельной крови в ПЦР, результат отрицательный.
Имели ли право мне отказать в повторном исследовании животного? При этом, диагноз установила лаборатория. Никто из врачей не выезжал в мое хозяйство, не проводил исследование ситуации. Все мои попытки провести повторное исследование встретили категорический отказ. Более того передать всю ругань, что я услышала в свой адрес, невозможно, врач эпизоотолог совершенно неадекватна.

Других положительно реагирующих животных уже забили, вскрытие ветсанэкспертом никаких изменений не выявило, пат материал на исследование, естесственно, никто не отправлял. При этом все замалчивается, скрывается, никто ничего не знает. Даже о том, что пришли результаты повторных анализов мне не сообщили.

Ознакомьтесь так же:  Сильные антибиотики от гонореи

Может ли это быть ложноположительная реакция в связи с беременностью, с воспалительным процессом?

Какие действия мне можно предпринять для установления диагноза?

Добрый день.
Могу Вам только посочувствовать. Но, боюсь, ваша козочка инфицирована. У коз положительным считается РА 1:100, а тут еще и РИД положительный. Что касается ПЦР крови, то это бессмысленный анализ, так как бруцелла находится в крови очень короткое время, в момент острой фазы. Далее она локализуется в суставах, половых органах. Поэтому, как правило, ПЦР крови всегда отрицательный. Показательным он будет при исследовании смывов с влагалища или абортированных плодов.
Так что, советую, поплакать и быстро забить и утилизировать .
И радоваться, что остальное стадо здорово. Я ж правильно понял, что повторные анализы тоже отрицательны? И люди здоровы! Бруцелла мелитензис очень вирулентна, заболеть можно на раз. Не лечится. Человек сразу получает инвалидность. Что касается повторного исследования положительно реагирующего животного, то инструкциями и руководствами это не предусмотрено, опять же из-за опасности заражения.
На счет замалчивания — это вряд ли. У Вас должен быть наложен карантин на весь поселок.

И есть вопрос — а почему Вы не вакцинируете свое стадо?

Зарегистрирован: 17/12/2015 08:41:34
Сообщений: 10
Оффлайн

Во-первых, забор крови провели в нарушение Ветеринарных правил ВП 13.3.1302-963. 2.2.3. Коров (нетелей), буйволиц и верблюдиц исследуют независимо от периода беременности, овцематок (козематок) и свиноматок через 1-2 месяца после окота или опороса, молодняк животных всех видов — с 4-месячного возраста. Хотя были предупреждены, что животные беременны.
А в инструкции О МЕРОПРИЯТИЯХ ПО ПРОФИЛАКТИКЕ И ЛИКВИДАЦИИ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ в разделе диагностика бруцеллеза есть пункт
2.6. В случае, когда в благополучном по бруцеллезу стаде (на ферме) при плановом исследовании от отдельных животных сывороток крови в РА (в том числе при переисследовании проб, положительных по РБП, но отрицательных по РСК) получен положительный результат — у крупного рогатого скота и лошадей в титре не более 200 международных единиц (МЕ), у буйволов, овец, коз и свиней — 100 МЕ, таких животных немедленно изолируют и через 15 — 20 дней дополнительно исследуют на бруцеллез комплексно серологическими (РА и РСК или РДСК) и аллергическим (кроме лошадей) методами. Одновременно этими же методами исследуют остальных животных стада (фермы).

Если при повторном исследовании в стаде (отаре) не выявлено реагирующих и отсутствуют другие признаки, вызывающие подозрение на заболевание животных бруцеллезом (аборты и проч.), а у исследованных ранее животных титр антител в РА не повысился, РСК (РДСК) и аллергическая проба окажутся отрицательными, то стадо считают благополучным в отношении бруцеллеза.

Более того в этой же главе написано, что даже если произошли аборты, делается бакисследование, животные полож реагируют, то их исследуют повторно!

Но ветеринары, сказали,что это не действующая(!) инструкция.

Почему такая перестраховка? Когда брали кровь на ПЦР, я покупала вакуумные прбирки, ни капли крови не было. Да и когда первично брали кровь, что не было угрозы, когда еще не знали о результатах?

У нас местность БЛАГОПОЛУЧНА и до этого скрининга не было НИ ОДНОГО положительного животного, более того даже сомнительного. Почему я должна прививать животных от того, чего отродясь у нас не было. У нас Ханты-Мансийский округ, не сельхоз район, не было бруцеллеза. И откуда он мог взятся лично в моем хозяйстве — это загадка. А доводы врачей, что типа с ногами занесли, я в сарай в уличной обуви не бегаю, да и три другие положительные головы живут за чертой города, а я в черие на другом конце от их всех. Общих стад у нас нет, пастбищ нет. Да и мои вообще за калитку не выходят.

На данный момент на мое хозяйство наложено ограничение. Так как они нарушили правила и взяли кровь у беременной козы, то мне ветинспектор написал письмо, что я должна содержать животное изолированно и через 2 мес после окота провести анализ. Я предложила во время родов, соблюдая осторожность, собрать околоплодные воды и оболочки плодов для исследования ПЦР или бак исследования. Мне заявили, что делать не будут и эти анализы не являются для них показательными.

Зарегистрирован: 17/12/2015 08:41:34
Сообщений: 10
Оффлайн

Зарегистрирован: 17/12/2015 08:41:34
Сообщений: 10
Оффлайн

И для чего то пишут такие рекомендации

МИНИСТЕРСТВО
СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА
И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РСФСР

ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА
И ИЕРСИНИОЗА И МЕРЫ ПО ИХ ПРОФИЛАКТИКЕ.
РЕКОМЕНДАЦИИ.

Москва, 1991 год.

При проведении плановых диагностических исследований животных на
бруцеллез в благополучных по этой болезни зонах обычно применяют реакцию
агглютинации (РА) или Роз бенгал пробу (РБП). При этом, особенно в весеннее
время, при исследовании сыворотки крови отдельных незараженных и не вакциро-
ванных против бруцеллеза животных с бруцеллезными антигенами могут быть
получены неспецифические результаты реакций.
Обычно появление таких реакций
обусловлено глубокой беременностью, стрессами, прививками против других болезней
или носительством близкородственных в антигенном отношении грамотрицательных
микроорганизмов (пастерелл, сальмонелл, кампилобактерий,иерсиний и др.), а также
рядом других причин.
Как правило, уровень выявляемых при этом агглютининов не
превышает 100 МЕ у свиней и овец и 200 МЕ у крупного рогатого скота, за исключением
случаев, когда животные являются носителям микроорганизмов из группы иерсиний,
в частности иерсинии энтероколитика серовара 0:9.
Оценка подобных показаний РА в ранее благополучных по бруцеллезу хозяйстах,
учитывая возможность заноса инфекции и длительного бессимптомного
болезни, затруднена и требует дополнительной расшифровки. В этих целях рекомендуется
использовать комплекс показателей, предусмотренных Инструкцией
о мероприятиях по
профилактике и ликвидации бруцеллеза животных, утвержденной бывшим Главным
управлением ветеринарии Госагропрома СССР 10.11.88 г., в том числе:
эпизоотологические данные, проявление клинических признаков болезни, сроки
иммунизации против других болезней, результаты исследований другими методами
(бактериологическим, РДСК, РСК, реакцией аллергии) и повторного (через 15-20 дней)
исследования сывороток крови этих и остальных животных данного стада (отары).
Практический опыт показыват, что комплекс дополнительных исследований в
большинстве случаев позволяет подтвердить или исключить наличие бруцеллезной
инфекции в хозяйстве (на ферме). Однако при этом нередко требуются значительные
затраты рабочей силы, времени и материальных средств на проведение ограничительных
мероприятий и для окончательного уточнения диагноза. В связи с этим быстрое
выявление и искоренение возникшего очага бруцеллезной инфекции, а также недопущение
неоправданного убоя скомпрометированных групп скота при выявлении гетероспецифических
серологических реакций с бруцеллезными диагностикумам
и имеют большую эпизоотологическую
и экономическую значимость.

Зарегистрирован: 19/03/2014 14:43:40
Сообщений: 544
Оффлайн

Я, правда, на вашей стороне.
Но обращу Ваше внимание на следующее.
Ветеринары правы, инструкция есть уже давно другая. Можете посмотреть ее на этом же сайте http://www.fsvps.ru/fsvps/laws/168.html#5

Повторные анализы проводятся при получении условно-положительного результата (сомнительного). Да и в «рекомендациях», которые Вы приводите, указано, что титр не должен превышать 1:100. А у Вас 1:200. Это много, для возможной ошибки.
Криворуких в лабораториях много, но не все же?
Вы можете обратиться лично в любую другую лабораторию и сделать у них независимый анализ (РА, РИД). Втихаря. Никто запретить не сможет. Если ничего не случится.
Что касается околоплодных вод и т.п., то тут, мне видится так: если коза больна, то родов не будет. Будет аборт. А если родит, то — здорова. Плоды и прочее, по условиям карантина Вы никуда вывезти не сможете. Это уже подсудное дело.
Почему перестраховка? Почитайте внимательно про энту болячку, встаньте на их место и ответьте — будете ли вы рисковать своим (и чужим) здоровьем и работой ради какой-то чужой козы? Или даже не ради козы, а просто?

Ознакомьтесь так же:  Какие препараты принимать при гриппе и орви

Что касается источника болезни, то тут много путей. Я ж не знаю всей истории Вашей козы и стада. Кто крыл, кто роги пилил и чем. Вам должно быть видней. Но, как правило, когда садишься и спокойно анализируешь, находится причина, о которой даже подумать бывает странно. Увы. Ну не спроста ж Вы не единственный случай оказался.

Зарегистрирован: 17/12/2015 08:41:34
Сообщений: 10
Оффлайн

Кровь можно взять в вакуумные пробирки, сыворотку тоже можно отделить, соблюдая правила. А по поводу плодных оболочек. После убоя все равно ветсанэксперт будет разделывать тушу, брать пат материал, ту же матку, плоды для бак исследования. И также я их повезу для исследования и за свои деньги. А так я еще б и ПЦР сделала. В чем разница? Почему нельзя сделать при жизни?
А насчет риска, ветеринар — это такая работа. Знаешь на что идешь.

Вот как то, так. Не подумайте, что нападаю, просто вопросов больше чем ответов. Все очень неоднозначно.

Зарегистрирован: 19/03/2014 14:43:40
Сообщений: 544
Оффлайн

Тест-системы должны быть чистыми. А что касается «бактериологических исследований», то, как мне известно, их нигде не делают! Ввиду большой опасности для персонала. Исключением, видимо, являются НИИ.

Да все можно. Согласен. Найдите ветеринара, любого, скажите ему про диагноз (обязательно!!) и попросите взять анализы Никаких проблем.
Ветсанэксперт — это не Вы, он имеет на это полномочия. Ну и сделайте ПЦР. Кстати, исследования на бруцеллез при возникновении очага проводятся за счет государства. И ПЦР они могут сами сделать.

На счет того, что ветеринар=камикадзе, не уверен.

Зарегистрирован: 19/03/2014 14:43:40
Сообщений: 544
Оффлайн

Да, на всякий случай, есть еще Наставления по бруцеллезу от 2003 года (вроде). Там ПЦР считается абсолютно достоверной при однократном исследовании. Правда, есть оговорка, что ее используют для уточнения серологии. И, опять же, не по крови! Хотя, вру, там кажется не уточняется.

А в целом так — если Вы абсолютно уверены, что коза здорова, то делайте независимый анализ. Если будет отрицательным — то бейтесь с управлением.

Это сообщение было редактировано 1 раз. Последнее обновление произошло в 17/12/2015 15:34:25

Зарегистрирован: 17/12/2015 08:41:34
Сообщений: 10
Оффлайн

Наверное,я сделаю запрос в Департамент ветеринарии, о том какие нормативные документы действительны. Если инструкция недействительна, почему ее мне зачитывал заместитель в департаменте ветеринарии?
Чтоб не быть голословной и не основываться на том, чего нет.
А бак исследования делают во всех лаборатория, сколько обзвонила, никто не отказал.
Не имею права самостоятельно взять, кровь должен брать вет врач, составить сопроводительную., подтвердить этим, что взято от конкретного животного. Может я совсем от другого могу взять. Это типа защита от подлога.

Они от забитых животных патматериал не взяли, не то что ПЦР сделали.

А про Наставление они вообще слышать не хотят, это для лабораторий типа только. А там.

1.2. Диагноз на бруцеллез у животных ставят на основании результатов бактериологического, серологического, молекулярно-генетического и аллергического исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, руководствуясь при этом санитарными и ветеринарными правилами по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных.
Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию.
Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию. (Я писала об этом ветврачам, им пофиг, они не руководствуются наставлением)

4.2.5. Диагностическая оценка реакции агглютинации

Реакцию считают положительной при наличии агглютинации с сывороткой крови крупного рогатого скота (буйволов, яков, зебу), верблюдов и лошадей, не иммунизированных или иммунизированных неагглютиногенными противобруцеллезными вакцинами (см. Прил. N 2, п.7), содержащей 200 ME антител и выше; овец и коз — 100 ME и выше; оленей (маралов) и собак — 50 ME и выше; пушных зверей и морских свинок — 10 ME и выше.

При выявлении среди не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, а также иммунизированных неагглютиногенными вакцинами крупного рогатого скота, верблюдов и лошадей, животных, реагирующих только в РА с содержанием антител 50-100 ME, а среди овец, коз, оленей (маралов), собак — 25 ME, считают сомнительно реагирующими и исследуют повторно через 15-30 сут. При повышении титров заболевание считают установленным. При сохранении титров на прежнем уровне проводят дополнительные исследования по дифференциации, согласно утвержденным методам.

При выявлении в стадах крупного рогатого скота, ранее иммунизированного против бруцеллеза агглютиногенными вакцинами (см. Прил. N 2, п.7), животных, реагирующих только в РА с содержанием не выше 200 ME антител и РСК в разведении сыворотки крови не выше 1:10, их повторно исследуют через 15-30 сут в РА, РСК и РИД. При повышении содержания антител в исследуемых сыворотках в РА и (или) РСК или положительной РИД заболевание считают установленным.
При выявлении в неблагополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота, ранее не иммунизированных или иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, животных, положительно реагирующих в РА с содержанием 100 ME антител и выше, признают больными. Реакцию считают сомнительной при содержании 50 ME антител. Сыворотки крови от таких животных через 15-30 сут исследуют повторно. При получении вновь сомнительного результата животных признают больными бруцеллезом.

При исследовании в РА неиммунизированных баранов-производителей, козлов, пробников и ярок, содержащихся в благополучных по бруцеллезу отарах, где овцы (козы) иммунизированы против бруцеллеза, реакцию считают положительной, а заболевание установленным при содержании в сыворотке крови животных 100 ME антител и выше. Реакцию считают сомнительной при наличии 50 ME антител. Сыворотки крови от таких животных через 15-30 сут исследуют повторно. При получении вновь сомнительных результатов животных признают здоровыми, а отару — благополучной по бруцеллезу.

ВИдите, есть понятие положительное и больное. Под какой пункт подпадает мой случай и написано диагноз считают установленным? По реакции РА в благополучном хозяйстве нельзя поставить диагноз бруцеллез.

А что с такими животными делают?

5. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА

5.1. Тест-система предназначена для выявления ДНК бактерий рода Brucella (B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. ovis, B. canis) в биологическом материале от животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, в случае аборта или проявления у них других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты), вызывающих подозрение на бруцеллез, и (или) при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования. (Ага, вуаля?)
5.2.3. Для исследования используют следующий патматериал:
— содержимое брюшной полости и желудка, селезенку, печень абортированного плода или весь плод;
— плаценту и плодовые оболочки от абортировавших животных;
— содержимое бурс, гигром;
кровь и молоко от абортировавших животных и (или) от животных, в сыворотке которых обнаружены агглютинины и (или) комплементсвязывающие антитела;
— сперму от самцов с признаками орхита и эпидидимита и (или) при получении сомнительных или положительных результатов аллергического или серологического исследования на бруцеллез или инфекционный эпидидимит баранов;
— в случае убоя животных для исследования отбирают парные лимфатические узлы подчелюстные, заглоточные, предлопаточные, надколенные, подколенные, надвыменные, парааортальные, тазовые и кусочки паренхиматозных органов (печень, селезенка); от самцов с признаками орхита или эпидидимита отбирают семенники с придатками.
5.6. Оценка результатов
При положительном результате ПЦР, зарегистрированном при исследовании хотя бы одной пробы материала, животное считают больным бруцеллезом.

Нигде не написано, что ПЦР является неинформативной.

Ознакомьтесь так же:  Когда появляются антитела к сифилису

Основные методы серологической диагностики бруцеллеза

К основным методам диагностики бруцеллеза относятся реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента (РСК) и реакция длительного связывания комплемента (РДСК).

Реакция агглютинации (РА). РА является основным методом диагностики бруцеллеза у сельскохозяйственных животных в СССР. Техника постановки реакции изложена в специальной инструкции. РА, как установил Бордэ, протекает двухфазно. Первая фаза — это соединение антитела с антигеном или гаптеном. Эта фаза визуально не определяется, в связи с чем подбираются условия для косвенного ее определения. Установлено, что первая фаза может протекать при отсутствии электролитов (солей), тогда как вторая фаза при таких же условиях протекать не может. При этом оказалось, что активность проявления второй фазы РА зависит от концентрации солей в разбавителе. Вместе с этим было установлено, что чем менее активный иммунный сывороточный глобулин, тем большая концентрация соли требуется в растворе.

При исследованиях, проведенных «в проблемной лаборатории ЛВИ, было установлено, что иммуннуе сыворотки крови отдельных видов животных проявляют в реакции агглютинации свою иммунологическую активность неодинаково в зависимости от концентрации хлорида натрия, вводимого в качестве разбавителя компонентов РА. Так, например, если иммунные бруцеллезные сыворотки крупного рогатого скота проявляют иммунологическую активность по РА в 0,25%-ном растворе хлорида натрия, то для получения аналогичных показателей реакции у овец нужно их иммунную бруцеллезную сыворотку исследовать по РА в 7—20%-ной концентрации раствора хлорида натрия. Поэтому мы предложили (1953) исследовать сыворотки крови овец на бруцеллез по РА в 10%-ном растворе хлорида натрия вместо 0,85%-ного раствора. 13 широкой практике было показано, что РА в 10%-ном растворе хлорида натрия способствует выявлению большего количества больных овец в неблагополучных отарах, а феномен положительной реакции представляется более отчетливым.

РА для исследования на бруцеллез может быть совершенствована также за счет антигена. По данным Альтона (1971), с иммунными сыворотками против Br. melitensis титры в РА с антигеном Br. melitensis были в 3,6 раза выше, чем с антигеном из штаммов Br. abortus + Br. suis (показана кратность самого низкого титра РА с антигеном Br. abortus и Вг, suis к самому высокому титру в РА с антигеном Br. melitensis). Средние данные следующие. Антигены Br. abortus (Br. suis) дали титры в 2,4 раза выше, чем антиген Br. melitensis с иммунными сыворотками против Br. abortus, и в 2,6 раза выше с иммунными сыворотками против Br. suis. С иммунными сыворотками против Br. melitensis РА с антигенами Br. melitensis показывала титры в 3 раза выше, чем с антигенами Br. abortus и Br. suis.

При исследовании сывороток крупного рогатого скота, инфицированного Вт. melitensis, результат был аналогичен. Часто кратные величины были настолько большими, что, сравнивая результаты РА, можно было ставить диагноз у крупного рогатого скота на бруцеллез за счет антигена Br. melitensis. Все препараты, использованные в этом опыте, были стандартизированы по прямой методике для интернациональной стандартной бруцеллезной сыворотки. Антиген Br. melitensis для РА, по данным автора, может быть использованв практике не только для овец, но и для крупного рогатого скота в районах Средиземного моря и других районах, где распространен бруцеллез и овец и крупного рогатого скота.

Комитет экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу (1971 г.) рекомендует выражать результаты пробирочных реакций агглютинации с сывороткой крови в международных единицах (ME). Для этой цели в центральной лаборатории Вейбридж изготовлена стандартная Anti Brucella abortus сыворотка (ISAbS).

Первая международная единица бруцеллезной сыворотки должна быть равна 0,091 мг сухого вещества, содержащегося в 1 мл сыворотки, изготовленной лабораторией Вейбридж. Эта лаборатория по заданию Комитета экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ приготовила сыворотку, которая была принята как стандарт экспертами ФАО/ВОЗ по бруцеллезу на втором заседании во Флоренции в октябре 1952 г. (сообщение 1953 г.).

Сухая стандартная первая интернациональная бруцеллезная сыворотка содержала 91 мг сухого вещества в 1 мл. Так как интернациональная единица в 1000 раз меньше обычной, то сухая сыворотка содержит, следовательно, 0,091 мг сухого вещества стандартной (первой) сыворотки (Квибридж). Следовательно, первый стандарт сыворотки — это 1000 интернациональных единиц; одна десятая стандарта равна 100 ИЕ и т. д.

Но в разных странах по-разному готовят антиген и учитывают РА. Поэтому сравнительный результат благодаря этой системе удовлетворяет как тест, но имеет второстепенное значение, поскольку РА применяется для диагностики бруцеллеза, а не для сравнения результатов. Поэтому была предложена (ФАО/ВОЗ) в масштабе всего мира «система единиц» (1957 г.). В основу этой системы положен титр агглютинации антигена (данной страны) международной стандартной сывороткой.

При таком критерии примеры следующие. Допустим, что в любой лаборатории титр стандартной сыворотки с местным антигеном равен 1 : 500, значит, по международному критерию при исследовании этим же антигеном сывороток при их титре 1 : 500 они будут содержать 1000 ИЕ. Если титр сывороток с местным антигеном 1 : 400, а со стандартной сывороткой 1 : 500, то тогда титр исследованной сыворотки по международному критерию будет равен 1 : 800 и так далее. Здесь применима следующая формула расчета: ab/c, где а — постоянная величина — 1000 ME; b — титр сыворотки, полученный с местным антигеном (в нашем примере 1 : 400); с — титр сыворотки, полученный с местным антигеном и стандартной сывороткой (в нашем примере 1 : 500).

В данном случае титр агглютинации антигена равен: (1000*400)/500 = 800 ME

Положительный результат считается, если сыворотка крови имеет агглютинационный титр 100 ИЕ в 1 мл. Для животных, вакцинированных вакциной из штамма № 19, титр повышается вдвое, т. е. до 200 ME.

В 1963 г. состоялось объединенное заседание Комитета экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ, где было принято решение выражать уровень агглютининов в международных единицах на 1 мл сыворотки крови или молока (МЕ/мл).

К 1965 г. первая стандартная сыворотка, приготовленная в количестве 1000 ампул лабораторией Вейбридж и содержащая 91 мг сухого вещества в 1мл, была исчерпана. Поэтому Комитет экспертов ФАО/ВОЗ по биологической стандартизации (1968 г.) поручил той же лаборатории изготовить новую стандартную сыворотку.

Новая сыворотка после широкой апробации в разных лабораториях была принята в качестве второго международного стандарта. Она содержит в 1 мл в среднем 95,52 мг сухого вещества, а международная единица — в тысячу раз меньше, т. е. 0,0955 мг сухого вещества. Из всех расчетов сохранились те, которые указаны для первой стандартной сыворотки.

Стандартная сыворотка, полученная на гладкий штамм Br. abortus биотипа 1, содержит преимущественно IgG-антитела. Выпускаемый в СССР стандартный антиген для РА подтитрован по количеству микробных клеток в 1 мл антигена, так что он соответствует по показаниям национальной стандартной сыворотке — международному стандарту. Диагностические титры при этом сохранились.

Ввиду принятия международного стандарта РА следует упомянуть о том, что минимальный диагностический титр для крупного рогатого скота, рекомендуемый Комитетом экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ, составляет 100 МЕ/мл для животных невакцинированных и 200 МЕ/мл для вакцинированных. Сомнительные титры установлены для невакцинированных животных 50 МЕ/мл, для вакцинированных — 100 МЕ/мл. Повторное исследование животных, давших сомнительные показания, производят через 60 дней.

Рекомендуется также проводить быстрый пластинчатый метод РА, хотя его считают менее чувствительным по сравнению с пробирочным.

Для овец диагностический титр пробирочной РА определяется 40 МЕ/мл.

Реакция связывания комплемента (РСК) и ее модификации. Наиболее чувствительная и достоверная модификация реакции связывания комплемента на холоде — реакция длительного связывании комплемента (РДСК) с титрованием гемолитической системы (метод П. А. Триленко). Эта реакция изложена в главе VI как официальный в СССР метод диагностики инфекционного заболевания овец, вызываемого Br. ovis. РДСК применяется также для диагностики бруцеллеза у сельскохозяйственных животных наравне с РСК. Новое наставление по постановке и учету РСК утверждено Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 27 мая 1976 г.