Вирусологическое исследование на гепатит в

Методы лабораторных анализов на выявление вирусов и особенности расшифровки результатов исследования

Стоимость медицинских услуг в коммерческих лабораториях может зависеть от типа услуги, ее сложности, срочности, а также других факторов.

Получить медицинские услуги можно не только в государственных медицинских лабораториях, но и в коммерческих медицинских центрах.

Для того чтобы результаты медицинских услуг были максимально достоверными, необходима правильная подготовка.

Спецпредложения, скидки и акции помогут существенно сэкономить на медицинских услугах.

Контроль качества клинических лабораторных исследований, осуществляемый по международным стандартам, – весомый аргумент при выборе независимой лаборатории.

Многие вирусы могут очень долго присутствовать в организме и циркулировать в крови, до поры до времени не вызывая никаких неприятностей. Однако это вовсе не значит, что они безопасны. Лабораторные анализы на вирусы позволяют выявить наличие последних, даже если никаких симптомов нет.

Анализы на вирусы: какие инфекции они выявляют

Для выявления вирусов лаборатории проводят исследования крови несколькими методами. Наибольшее распространение на сегодня получили ПЦР и иммуноферментный (ИФА) анализы.

Иммуноферментный анализ крови определяет наличие антител к вирусам (или антигенов к ним) в крови — иммуноглобулины (lgA, lgG, lgM) вырабатываются при заражении вирусами и являются своеобразными маркёрами инфекции.

Анализ на ДНК вируса, или ПЦР-исследование, позволяет выявить тип инфицирующего агента.

В качестве биоматериала для исследования обычно берут кровь. Анализ крови может подтвердить гепатит, герпес и вирус Эпштейна-Барра, аденовирус, различные половые инфекции (в том числе и сифилис), вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) и другие инфекции. Однако кровь не единственный биоматериал, пригодный для выявления вирусных поражений. В зависимости от заболевания и симптомов, для анализа на вирусы сдают соскоб слизистой оболочки, кал, мочу, мазок, слюну.

Методы анализа на вирусы

Как мы уже отмечали, исследование крови на вирусы можно проводить двумя разными способами. Расскажем о них подробнее.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это новый способ выявления вирусов, основанный на принципах молекулярной биологии. ПЦР идентифицирует генетический материал «агрессора». Так можно установить и вид вируса, и, что особенно важно, количество инфицированных клеток. Для проведения анализа биоматериал, в котором могут находиться фрагменты ДНК или РНК возбудителя болезни, смешивают с особыми ферментами, создающими копию этих фрагментов. Каждая копия также создает копию, и вскоре на лабораторном стекле оказывается количество молекул, достаточное для идентификации «врага». Их анализируют и сравнивают с базой данных, чтобы выяснить тип вируса. Этот способ эффективен для выявления разных инфекций (не только вирусных) — гепатита, многих половых инфекций (уреаплазмоза, хламидиоза), микоплазмоза, ВИЧ, папилломавируса, вируса гриппа и некоторых других.

Иммуноанализ (ИФА)

Иммуноферментный метод анализа на вирусы позволяет установить форму болезни, вызванной вирусом (хроническая, острая или бессимптомная), а также оценить эффективность противовирусной терапии. Это один из самых распространенных и точных методов для выявления половых инфекций, в частности ВИЧ и ВПЧ, гепатита В.

Для анализа на вирусы чаще всего сдается кровь. Обязательно предупредите врача, если вы недавно проводили вакцинацию, — этот факт может отразиться на точности анализов. Рекомендуется не принимать пищу на протяжении 8-ми часов перед забором биоматериала, а также воздержаться от употребления алкоголя и от курения.

Время ожидания результатов зависит от типа вируса, на который проводится анализ, и от методики работы лаборатории. Обычно результаты готовы через 1–3 дня, но иногда приходится ждать и 2 недели.

Расшифровка результатов анализа на вирусы

Рассказать о том, каким образом следует трактовать результаты анализов на все виды вирусов, в рамках одной статьи невозможно. Далее мы поговорим лишь о наиболее известных заболеваниях и о часто назначаемых исследованиях.

В случае проведения анализа методом ИФА наличие IgG в крови на гепатит говорит о том, что этот вирус в организме присутствовал, но иммунная система выработала к нему антитела. Присутствие одновременно антител класса IgM и IgG говорит о заболевании в острой форме. Иммуноглобулины только класса IgM — признак первичного инфицирования.

При проведении исследования методом ПЦР определяется РНК вируса. Результаты могут быть приведены в следующем формате:

  • РНК вируса не выявлена.
  • РНК вируса выявлена в концентрации ниже предела количественного определения (менее15 МЕ/мл). Сомнительный результат.
  • РНК вируса гепатита С выявлена (от 15 и выше 100000000 МЕ/мл).

Для выявления этого вируса гепатита чаще всего назначается ИФА. Если в крови присутствуют антитела IgG и IgM, это значит, что вирус очень активен или же заражение произошло недавно.

В случае проведения ПЦР-анализа определяется концентрация фрагментов ДНК вируса гепатита В. Пациент получает результат с одной из приведенных трактовок:

  • Не обнаружено.
  • Сомнительный результат (результат положительный с концентрацией ДНК вируса гепатита В на границе точности метода).
  • Обнаружено.

Если говорить о трактовке ИФА, то наличие антител, обозначаемых как Anti-HSV-IgG, говорит не об иммунитете к вирусу, а о том, что вы уже были когда-то инфицированы. Этот маркёр наблюдается у большинства пациентов. Если показатель anti-HSV-IgG в пробах, взятых в динамике за 2-недельный период, заметно растет, это значит, что заражение произошло недавно. О рецидиве говорит высокий показатель IgG.

Папилломавирус

Для выявления этого вируса исследуется соскоб эпителиальных клеток. Наличие вируса выявляется методом идентификации его ДНК. Если в результате сказано «ДНК не обнаружено», это говорит об отсутствии вируса. Менее 3 Lg говорит о незначительной концентрации вируса, 3–5 Lg – о клинически значимой, более 5 Lg — об очень высокой.

Вирус Эпштейна-Барр

Если иммуноглобулины VGA IgM, VGA IgG, EA IgG и EBNA IgG в бланке анализа значатся как «отрицательные», вируса в организме нет. Положительный VGA IgM при отрицательном результате на остальные антитела сигнализирует о ранней стадии заражения.

Вирус иммунодефицита человека

Расшифровка анализа крови на ВИЧ очень проста — если результат отрицательный, это значит, что вирус не обнаружен, если положительный — увы, вирус в крови есть. Но следует знать, что сегодня даже самые надежные методы точны лишь на 98–99%, то есть всегда остается шанс, что результат будет, например, ложноположительным.

Аденовирус

При анализе на аденовирус, вызывающий респираторные заболевания, применяется в основном ИФА. В ходе анализа подсчитываются IgG-антитела. Если показатель менее 0,8 условных единиц — результат отрицательный, более 0,8 — положительный.

Ротавирус (в народе его называют кишечным гриппом) — острая кишечная инфекция, самый распространенный возбудитель диареи. Для анализа обычно берется образец кала. Обозначение «отрицательно» в результатах говорит о том, что следов антигенов не обнаружено, «положительно» — что состояние вызвано именно ротавирусом.

Проходить обследование на вирусы обязательно, даже если нет никаких изменений в самочувствии. Как мы уже говорили, некоторые вирусные поражения никак не проявляют себя, однако отсутствие симптомов еще не означает, что человек здоров. Яркий пример таких «тихих» вирусов — ВИЧ, который на ранних стадиях не дает никаких симптомов, оставаясь, тем не менее, смертельно опасным.

Где можно сдать анализы на выявление вирусов?

Анализ на вирусы можно сдать в любой лаборатории. Как выбрать подходящую, рассказывает эксперт сети диагностических лабораторий «ИНВИТРО»:

«Государственные поликлиники и лаборатории могут быть хорошо оснащены, однако система приема в них так неудобна, что многие люди бесконечно откладывают проверку здоровья только из нежелания тратить время на бесконечное стояние в очередях и пропускать работу из-за неудобного графика работы муниципальных медучреждений. Их можно понять, однако здоровье важнее потерянного времени!

Дилемма решается обращением в частную лабораторию. Их гораздо больше, чем муниципальных, так что рядом с вашим домом или офисом точно есть несколько подходящих. У «ИНВИТРО», например, более 800 отделений по всей стране, они расположены как в центре крупных городов, так и на окраинах, и все работают по графику, комфортному для современных занятых людей.

Исследования на многие типы вирусов требуют времени. Но если вы выбрали крупный диагностический центр, у которого есть собственный лабораторный комплекс, ожидание будет короче. У нас, например, 9 технологических комплексов: в Москве, Санкт-Петербурге, Челябинске, Новосибирске и Самаре, на территории Украины — в Днепропетровске, на территории Республики Беларусь — в Минске, на территории Казахстана — в Алматы и Астане. Это позволяет нам обрабатывать данные максимально быстро. А результат вы можете получить так, как вам удобнее — в Личном кабинете на сайте, в распечатанном виде с курьером, по электронной почте и даже по телефону — чтобы сохранить врачебную тайну, в последнем случае мы попросим вас придумать кодовое слово и сказать его оператору.»

P.S. «ИНВИТРО» — крупнейшая в нашей стране сеть независимых лабораторий, которая работает с 1995 года.

Лицензия на осуществление медицинской деятельности ЛО-77-01-015932 от 18.04.2018.

www.progepatit.ru

Вирусологические исследования гепатита А

В 1982 г. HAV (вирус гепатита А) был отнесен к энтеровирусам типа 72, принадлежащим к семейству Picornaviridae. В дальнейшем после расшифровки генома HAV (вирус гепатита А) и секвенирования его белков, правильность такой классификации была поставлена под сомнение и HAV (вирус гепатита А) был отнесен к новому роду гепатовирусов.

HAV (вирус гепатита А) имеет икосаэдрическую форму и лишен внешней оболочки. Его диаметр равен 27-28 нм, плавучая плотность в хлориде цезия составляет 1,33-1,34 г/см3, коэффициент седиментации при ультрацентрифугировании — 150-160S. Вирус выдерживает действие эфира и кислой среды при рН=3. Он переносит также нагревание до 60 °С в течение 60 мин, но при нагревании до 85 °С инактивируется в течение 1 мин. HAV (вирус гепатита А) способен выжить в морской воде (выживаемость — 4%), сохраняется в сухих фекалиях при комнатной температуре в течение 4 нед (выживаемость — 17%), в живых устрицах — 5 дней (выживаемость — 12%).

Известен лишь один серотип HAV (вирус гепатита А), который не имеет общих антигенных детерминант с вирусами гепатита В, С, D, Е и G. Геном HAV (вирус гепатита А) представлен линейной плюс-цепью РНК длиной 7480 нуклеотидов. Коэффициент седиментации РНК вируса гепатита А равен 32-33S, а молекулярная масса — 2,8х104. РНК вируса гепатита А имеет протяженную открытую рамку считывания, состоящую из 6681 нуклеотида и ковалентно связана с 5′-белковым концом и З’-полиаденилатным концом.

Ознакомьтесь так же:  Признаки кандидоза во рту у детей

Репликация HAV (вирус гепатита А) в культуре клеток начинается спустя несколько недель или месяцев. Благоприятной средой для размножения вируса in vitro являются культура клеток обезьян, особенно почечных клеток зеленой мартышки, первичные фибробласты и диплоидные клетки (MRC-5) человека и клетки почки эмбрионов макак-резус. Вирус не обладает цитопатическим свойством и поэтому персистирует в культуре длительное время. Исход репликации вируса в культуре клеток зависит от двух условий. Во-первых, важную роль играет сохранение генома вируса; штаммы HAV (вирус гепатита А) по мере адаптации к культуральной среде мутируют в определенной области генома. Во-вторых, существенное значение имеет метаболическая активность клеток хозяина в момент их инфицирования. Хотя клетки культуры инфицируются одновременно, репликация HAV (вирус гепатита А) начинается асинхронно. Такая асинхронность может быть связана различиями в метаболической активности отдельных клеток, однако убедительных доказательств зависимости репликации HAV (вирус гепатита А) от фаз деления клетки нет.

Начальным этапом в жизненном цикле вируса является его прикрепление к рецептору клетки. Локализация и функция рецепторов определяют тропизм вируса. О механизме проникновения HAV (вирус гепатита А) в клетки известно мало. По некоторым данным, HAV (вирус гепатита А) может инфицировать клетки по механизму связывания с суррогатными рецепторами (с помощью неспецифического белка сыворотки крови). Показано, что для заражения культуры клеток HAV (вирус гепатита А) необходим кальций, в то время как обработка клеток трипсином, фосфолипазами и |3-галактозидазой препятствует их инфицированию вирусом. На поверхности почечных клеток зеленых мартышек идентифицирован гликопротеин HAV (вирус гепатита А)cr-1, который является рецептором HAV (вирус гепатита А). Блокирование HAV (вирус гепатита А)cr-1 специфическими моноклональными антителами предотвращает инфицирование клеток культуры, функция которых в остальном не нарушена. По данным экспериментов, HAV (вирус гепатита А)cr-1 не только является рецептором HAV (вирус гепатита А), но и способствует высвобождению вирусной РНК и ее внедрению в гепатоцит.

Независимо от механизма проникновения в гепатоцит, HAV (вирус гепатита А), оказавшись в клетке, освобождается от белков, РНК оказывается в цитоплазме гепатоцита, попадает в рибосомы, в результате чего образуются полисомы. Происходит трансляция с образованием крупного полипротеина, состоящего из 2227 аминокислотных остатков. В нем выделяют три области: PI, Р2 и РЗ. Область Р1 кодирует структурные белки VP1, VP2, VP3 и предположительно VP4. Области Р2 и РЗ кодируют неструктурные белки, имеющие отношение к репликации вируса.

РНК-полимераза HAV (вирус гепатита А) копирует плюс-цепь РНК. На образовавшемся транскрипте транслируются белки, которые используются при сборке зрелой вирусной частицы. Полагают, что после образования зрелых вирусов синтез РНК вируса гепатита А подавляется. Кроме того, при персистирующей инфекции выявлен ряд специфических белков, связывающихся с РНК. Происхождение и природа этих белков неизвестны, но они проявляют активность на РНК-матрице и, по-видимому, играют роль регуляторов репликации HAV (вирус гепатита А).

Существуют многочисленные штаммы HAV (вирус гепатита А), характеризующиеся значительной вариабельностью, нуклеотидной последовательности (область Р1 генома отличается у различных штаммов на 15-25%). Штаммы HAV (вирус гепатита А) по генотипу можно объединить в четыре группы (I, И, III и VII), в то время как штаммы, распространенные у обезьян, относятся к IV, V и VI группам. Несмотря на различную нуклеотидную последовательность значительного участка РНК, антигенные детерминанты характеризуются высокой консервативностью и у разных штаммов практически одинаковы.

Полагают, что белки VP1/2A и 2С определяют вирулентность HAV (вирус гепатита А). Основанием для такого мнения явились эксперименты, в которых у животных вызывали острый гепатит, заражая их рекомбинантными вирусами. Было получено 14 таких вирусов с химерным геномом из двух клонов инфекционных комплементарных ДНК, кодирующих вирулентный и аттенуированный изолят HAV (вирус гепатита А) (штамм НМ175), и проведено сравнительное изучение генотипа и фенотипа каждого вируса.

Из многочисленных штаммов HAV (вирус гепатита А) наиболее важное значение имеют человеческие штаммы НМ175 и CR326, так как именно они используются для получения вакцин против гепатита А. Штамм НМ175 был изолирован в Австралии в 1978 г. из фекалий больного гепатитом А во время небольшой эпидемии. Штамм CR326 был изолирован из фекалий коста-риканских больных гепатитом А. Сходство нуклеотидной и аминокислотной последовательности этих штаммов достигает 95%, а вакцины, получаемые на их основе, эффективны против всех существующих штаммов HAV (вирус гепатита А).

Вариабельность генома HAV (вирус гепатита А) играет роль в развитии фульминантной печеночной недостаточности при острой HAV (вирус гепатита А)-инфекции. Был секвенирован нетранслируемый участок на 5′-конце генома HAV (вирус гепатита А), выделенного из сыворотки 84 больных гепатитом А, в том числе 12 больных с фульминантной печеночной недостаточностью. Анализ показал, что этот участок генома у больных с фульминантной печеночной недостаточностью менее подвержен изменениям, чем при более легком течении заболевания (Р

Вирус гепатита С (ВГС), РНК,качественный формат, ультрачувствительный тест (Hepatitis C Virus (HCV) RNA, qualitative, ultrasensitive)

Литература

  • Рекомендации по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом С. МЗ РФ, 2014.
  • EASL (European Association for the Study of the Liver . Clinical Practice Guidelines. Diagnosis of acute and chronic hepatitis C. Goals and endpoints of HCV therapy.
  • http://www.easl.eu/research/our-contributions/clinical-practice-guidelines/detail/management-of-hepatitis-c-virus-infection-revised-version/report/4
  • Материалы фирмы-производителя реагентов.
  • В диагностических целях при выявлении антител к вирусу гепатита С в скрининговом тесте.
  • Для подтверждения устойчивого вирусологического ответа по окончании терапии хронического гепатита С.
  • В дополнение к исследованию антител для скрининга гепатита С пациентам с приобретенным иммунодефицитом либо получающим иммуносупрессивную терапию (лимфопролиферативные опухоли, пациенты, получающие лучевую или химиотерапию по поводу онкологических заболеваний, системную терапию глюкокортикостероидами при аллергических или аутоиммунных заболеваний, программный гемодиализ и др.).
  • Пациенты с заболеваниями печени неустановленной этиологии.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследовани¤, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ

А. А. Асратян Институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН,
Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова

Основой лабораторной диагностики вирусных гепатитов служат:

— знания об их возбудителях и репликации

— информация о появлении и исчезновении маркеров инфицирования

— современные иммунохимические и молекулярно- биологические методы детекции антигенов, антител и нуклеиновых кислот/

Лабораторная диагностика гепатита В (ГВ) Строение вириона см. рис. 1.

Лабораторная диагностика ГВ — основана на выявлении специфических для ГВ антигенов и соответствующих антител в крови, а также вирусных нуклеиновых кислот, основными из которых являются:

НВ sAg — анти-НВ s

анти-НВс класса Ig М и IgG

НВе Ag — анти-НВе

Наиболее широко в диагностике ГВ используется определение НВsAg. Данный антиген выявляется как при остром, так и при хроническом заболевании (однако острая инфекция обычно подтверждается наличием высоких титров анти-НВс IgМ). При остром ГВ поверхностный антиген вируса обнаруживается через 3-5 недель от момента инфицирования, то есть задолго до появления клинических признаков болезни и в этих случаях является единственным серологическим маркером. НВsAg постоянно выявляется в преджелтушном и желтушном периодах болезни. Персистирование НВsAg в течение 6 месяцев и более указывает на затяжное или хроническое течение болезни, и позволяет предположить хроническое носительство вируса. Элиминация НВsAg и появление антител к нему является непременным условием выздоровления. Серологическими маркерами репликации ВГВ являются — анти-НВс класса IgМ, НВеAg, ДНК и ДНК-полимераза, которые обнаруживаются при остром ГВ с первых дней клинических проявлений и могут обнаруживаться при обострении хронического ГВ. Серологические маркеры репликации ВГВ определяют как в целях общей диагностики, так и для оценки эффективности применяемой терапии. НВсAg выявляется в ткани печени и не определяется в сыворотке крови. Опосредовано его присутствие в организме отражают циркулирующие антитела – анти-НВс класса IgМ и IgG. В острый период ГВ наличие анти-НВс класса IgМ является дополнительным маркером этого заболевания. Однако необходимо учитывать, что около 50% больных хроническим ГВ также могут иметь эти антитела в периоде обострения, но чаще в низких концентрациях. Наличие в сыворотке крови только анти-НВс класса IgG наблюдается в период между исчезновением НВsAg и образованием анти-НВs. Сочетанное выявление анти-НВс класса IgG в низком титре с анти-НВs указывает на перенесенную ГВ-инфекцию и наличие иммунитета. Тестирование НВеAg проводят в сыворотках крови только с наличием НВsAg и позитивный результат данного маркера свидетельствует об активном процессе – либо подтверждает диагноз острого ГВ, либо свидетельствует об обострении хронического ГВ. Длительность циркуляции НВеAg имеет важное прогностическое значение: выявление НВеAg через 2 и более месяца после начала заболевания служит признаком возможного развития хронического гепатита. Выявление НВеAg без присутствия НВsAg в сыворотке крови в подавляющем большинстве случаев указывает на ложный результат анализа. Однако больные, инфицированные мутантным вирусом могут оставаться серонегативными по НВеAg, несмотря на сохраняющуюся инфекционность и наличие анти-НВе Наличие ДНК-ВГВ (наиболее чувствительный маркер продолжающейся репликации ВГВ) в сыворотке крови указывает на высокую инфекционность данного образца и активное размножение вируса в организме. Позитивный результат удается зарегистрировать практически у всех больных острым ГВ в разгар заболевания. Снижение его концентрации в процессе лечения хронического гепатита является хорошим прогностическим признаком, указывающим на эффективность применяемой терапии. Высокая активность аминотрансфераз сыворотки отражает воспалительное повреждение ткани печени, вызываемое преимущественно реакциями иммунной системы организма против инфицированных вирусом гепатоцитов, а не прямым цитопатическим действием вируса. Высокий уровень ДНК-ВГВ в сочетании с низким уровнем аминотрансфераз свидетельствует о недостаточном иммунном ответе организма. Выявление анти-НВе при отсутствии НВеAg и ДНК-ВГВ свидетельствует о закончившейся активной репликации инфекции. Сероконверсия НВsAg в анти-НВs происходит у 90-95% больных с острым ГВ в стадии разрешения инфекционного процесса и, является показателем иммунитета к вирусу ГВ, то есть наличие анти-НВs свидетельствует о перенесенной инфекции и наличие иммунитете к этой инфекции. Лица, имеющие эти антитела в защитной концентрации (10 МЕ и более) не болеют ГВ и не нуждаются в вакцинации. Все применяемые методы исследования для определения специфических маркеров ГВ можно разделить на 2 группы – иммунохимический и молекулярно-биологические. Иммунохимические – основное место принадлежит иммуноферментному анализу (ИФА) с его высокой чувствительностью и специфичностью, простотой проведения и стабильностью реактивов. Молекулярно-биологические – точечная и жидкостная гибридизация, а также цепная полимеразная реакция (ПЦР) – позволяет выявлять наличие ДНК-ВГВ непосредственно, либо с помощью определения вирусоспецифического фермента – ДНК- полимеразы. НВ sAg /анти-НВ s Для выявления основного маркера ВГВ, разработаны разнообразные методы, позволяющие определить антиген в концентрации до 0,05 нг/мл, которые подразделяются на так называемые «поколения» (табл. 1). В настоящее время основным методом обнаружения НВsAg является ИФА Важным этапом в развитии лабораторной диагностики вирусных гепатитов в России стали проведение (с 1998 г.) сравнительных испытаний диагностических препаратов для оценки их качества под эгидой МЗ РФ. Современные диагностические препараты обладают высокой специфичностью, но возможны и ложноположительные результаты. Для разграничения ложноположительных от истинно положительных результатов применяется тест нейтрализации НВsAg – специфической сывороткой. Принципиально новым для системы выявления НВsAg стало требование к отечественным производителям диагностических препаратов – обязательное включение в тест-систему слабоположительного контрольного образца, содержащего НВsAg в концентрации 1 нг/мл. Для определения анти- НВsAg был испытан весь спектр иммунохимических методов, основной из которых сейчас – ИФА (для качественного и количественного анализа). Анти-НВс класса Ig М и IgG , НВе Agанти-НВе (рис. 2 и табл. 2) Для тестирования этих маркеров могут быть использованы различные варианты твердофазного иммуноанализа: иммуноферментный, радиоиммунный, химиолюминисцентный и их различные варианты. ДНК ВГВ — определяют при помощи проведения ПЦР– анализа. В настоящее время наиболее широкое распространение получили амплификационные методы детекции ДНК ВГВ. Появилась возможность определять ДНК ВГВ в качественном и количественном варианте.

Ознакомьтесь так же:  Ротавирусная инфекция температура понос

Лабораторная диагностика гепатита Д (ГД) Вирус гепатита Д (ВГД) – это дефектный вирус, содержащий одно-спиральную РНК, которому для репликации необходимо помощь вируса ГВ для синтеза оболочечных белков, состоящих из HBsAg, который используется для инкапсуляции генома ВГД. ВГД не принадлежит ни к одному из известных семейств вирусов животных, по своим свойствам ВГД наиболее близок к вироидам и сателлитным вирусам растений. Лабораторная диагностика осуществляется путем обнаружения серологических маркеров ВГД, включая наличие антигена, антител к нему и РНК ВГД. Обнаружение антигена ВГД и РНК ВГД в сыворотке крови или ткани печени свидетельствует о наличии активной ГД-инфекции, однако, следует отметить, что эти маркеры могут не обнаруживаться в сыворотке больных фульминантным ГД. Маркером активной репликации ВГД также является анти-ВГД класса IgМ. Серологические маркеры инфекции ГД зависят от того, как был приобретен вирус – в виде коинфекции с ВГВ (у большинства больных заболевание имеет острое течение и заканчивается выздоровлением) или суперинфекции у больных с хронической ГВ-инфекцией (протекает тяжелее, чем коинфекция — в 10% развивается фульминантный гепатит). При коинфекции в большинстве случаев антитела — анти-ВГД класса IgМ и IgG — обнаруживаются в течение заболевания. Титр анти-ВГД обычно снижается до практически неопределяемых уровней после выздоровления, и не сохраняется никаких серологических маркеров того, что человек был когда-либо инфицирован ВГД. Антиген ВГД определяется только у 25% больных и обычно исчезает вместе с исчезновением HВsAg. При суперинфекции у больных с хронической ГВ-инфекцией серологическая картина имеет следующие характерные особенности: – титр HBsAg снижается к моменту появления антигена ВГД в сыворотке; — антиген ВГД и РНК-ВГД продолжают определяться в сыворотке, так как обычно у большинства пациентов с суперинфекцией ГД (70-80%) развивается хроническая инфекция, в отличие от случаев коинфекции; — определяются высокие титры антител (анти-ВГД) как класса IgМ, так и IgG, которые сохраняются неопределенное время. Серологические маркеры вируса ГД определяют методом иммуноферментного и радиоиммунного анализа, а РНК-ВГД — методом полимеразной цепной реакции. Отечественными и зарубежными промышленными биотехнологическими предприятиями выпускаются диагностические наборы, включающие все необходимые компоненты и реактивы для постановки теста. В диагностических препаратах используют дельта-антиген, полученный из печени сурков, экспериментально зараженных ГД; антиген, выделенный из печени погибших носителей ВГД; дельта-антиген, полученный генно-инженерным способом.

Лабораторная диагностика гепатита С (ГС) Открытие возбудителя ГС стало возможным благодаря методам молекулярной биологии в 1989-1991 гг. Сначала путем клонирования был получен из сыворотки больных с гепатитом “ни-А, ни-В” вирусный геном, а затем был установлена и структура самого вируса. Физико-химическая характеристика вируса позволили отнести ВГС к семейству флавовирусов. Геном вируса ГС (ВГС) представлен однонитчатой позитивной РНК, состоящих из 10 000 нуклеотидных оснований, образующих регионы, которые кодируют три структурных белка (С, Е1, Е2) и пять неструктурных (NS2, NS3, NS4, NS5). Особенностью ВГС является чрезвычайно высокая гетерогенность его генома. Анализ нуклеиновых кислот РНК-ВГС различных изолятов выявил существенные отличия в их первичной структуре. На основании этих данных была построена классификация ВГС, разделяющая их на варианты ( их 6-9) и субтипы- генотипы, одни из которых присутствуют во всех регионах мира, а другие только в отдельных странах. Лабораторная диагностика ГС была решена при помощи современных методов молекулярной биологии, учитывая, что при ГС вирус находится в крайне низкой концентрации и его антигены не доступны выявлению с помощью современных методов индикации, усилия исследователей сосредоточены на выявлении антител к различным антигенным компонентам вируса, обнаружение которых может служить индикатором наличия вируса. В качестве антигенов использовали белки, кодированные структурной и неструктурной зоной РНК-ВГС, полученные при помощи рекомбинантной технологиии или синтеза (полипептиды, используемые в современных иммунологических методах – С22-3; С33с, С100-3, С200, NS5, S-1-1). Лабораторная диагностика ГС основывается на обнаружении серологических маркерв ВГС: антител к вирусу ГС (анти-ВГС, анти-ВГС класса IgМ, IgG) методом ИФА и РНК-ВГС методом ПЦР. К настоящему времени разработаны 4 поколения тест-систем для выявления анти-ВГС в иммуноферментном методе, но ИФА первого поколения сейчас не используется из-за низкой чувствительности. РНК-ВГС является показателем активной репликации ВГС и самым ранним маркером инфекции, и может быть обнаружена методом полимеразной цепной реакции уже через 1- 2 недели после инфицирования, незадолго до повышения уровня сывороточных трансаминаз. Анти-ВГС обнаруживаются к 5-6 неделе после начала гепатита в 80% случаев и к 12 неделе у 90% лиц методом иммуноферментного анализа. При определении анти-ВГС в некоторых случаях регистрируется ложноположительная реакция. Для разграничения ложноположительных образцов от образцов действительно содержащих антитела к ВГС, разработаны дополнительные тесты – рекомбинантный иммуноблотинг, определение спектра белков анти-ВГС. Иммуноблотинговые диагностикумы позволяют исключить неспецифический результат, полученный методом ИФА, однако визуальная оценка иммуноблотинговых полос может быть неоднозначной в разных диагностических центрах. В нашей стране более широкое распространение получили отечественные подтверждающие твердофазные иммуноферментные тест-системы (так называемы системы «Спектр»), основанные на определении антител к отдельным вирусным антигенам: core, NS3, NS4ab, NS5a. Выявление РНК ВГС считается «золотым» стандартом в диагностике ГС и подтверждением положительных результатов обнаружения анти-ВГС. В настоящее время для индикации РНК ВГС используется ПЦР в качественном и количественном варианте. Чувствительность методов определения РНК ВГС повышается с каждым годом, достигая в настоящее время 10-50 копий РНК в 1 мл крови. Диагноз хронического ГС у лиц с наличием анти-ВГС обычно ставится на основании повышенных печеночных проб в течение более 6 месяцев.

Лабораторная диагностика гепатита А (ГА) Вирус ГА (рис. 3) — это РНК- содержащий вирус, размером 27 нм, классифицированный как пикорнавирус. Во всех изолятах собранных в разных частях мира, наблюдается только один серотип ВГА. ВГА не имеет наружной оболочки, но состоит из наружной белковой капсулы, или капсида, содержащего внутри положительную одноцепочную РНК, который действует в качестве матрицы для выработки вирусных белков внутри клетки-хозяина. Лабораторная диагностика ГА основана на выявлении маркеров вируса ГА – антигена ВГА, антител (анти-ВГА класса IgМ и IgG ), а также РНК ВГА. Окончательным доказательством о текущей или недавней инфекции служит наличие в сыворотке крови (даже в одной пробе сыворотки) антител к ВГА класса IgM (анти-ВГА IgM) и наличие ВГА в фекалиях. На перенесенную инфекцию ГА, а также на длительный иммунитет, указывает наличие антител к ВГА класса IgG (анти-ВГА IgG). Диагноз острого ГА подтверждается в острой или ранней стадии выздоровления при наличии анти-ВГА класса IgM, которые появляются в последние 5-10 дней инкубационного периода и продолжают выявляться на протяжении 6-7 месяцев от начала заболевания. Кроме того, эти антитела могут быть выявлены в первые месяцы у лиц (20-30%), вакцинированных инактивированной вакциной против ГА. Их образование связано с первичным иммунным ответом на введение антигена, а не на инфекцию, вызванную вакциной. РНК ВГА может быть выявлена за несколько дней до повышения активности АлАТ и в течение 5 — 59 дней заболевания при типичном течении ГА; при затяжных случаях — РНК ВГА в среднем может определяться до 95 дней. Антиген вируса ГА (ВГА-Ag) обнаруживается в фекалиях больных за 7-10 дней до проявления клинических симптомов и в первые дни заболевания, что используется также для ранней диагностики и выявления источников возбудителя инфекции. Концентрация ВГА в фекалиях является наивысшей на протяжении 2-х нед. перед появлением желтухи. У взрослых выделение вируса с фекалиями продолжается обычно менее одной недели после появления желтухи. Вирус, однако, был обнаружен также через 2 мес. от начало заболевания (во время обострения). Дети могут выделять вирус более длительно, чем взрослые, возможно в течение нескольких недель после клинического проявления заболевания. Хроническое выделения ВГА из фекалий не отмечается. Определение антигена ВГА нашло также применение в санитарной вирусологии при исследовании воды на наличие вируса. Анти-ВГА класса IgG (рис. 4) также появляются рано в начале заболевания (с 3-4 недели), сохраняются на протяжении всей жизни и обеспечивают пожизненную защиту от этого заболевания. Определение анти-ВГА IgG используется для изучения иммуноструктуры населения, динамики специфического гуморального иммунитета. Определение анти-ВГА класса IgG важно также для пред- и поствакцинального скрининга (минимальная протективная концентрация анти-ВГА соответствует 20 МЕ/л). Для их определения отечественными производителями выпускаются коммерческие диагностические препараты иммуноферментного анализа. Лабораторная диагностика основана на выявлении маркеров вируса ГА с помощью специфических иммунодиагностических методов — методы ИФА, РИА. Отечественными и зарубежными промышленными биотехнологическими предприятиями выпускаются диагностические наборы, включающие все необходимые компоненты и реактивы для постановки теста. Кроме твердофазных ИФА и РИА с успехом применяется и метод иммуноэлектронной микроскопии, метод ПЦР. Все вышеупомянутые методы иммунодиагностики с равной вероятностью выявляют инаппарантные, бессмиптомные или клинически выраженные формы ГА. Особое место в лабораторной диагностике ГА занимают молекулярно-генетические методы тестирования РНК ВГА. ПЦР диагностика позволяет обнаружить РНК ВГА в концентрации 40 копий/мл. В настоящее время происходит накопление данных о месте ПЦР в системе лабораторной диагностики ГА.

Ознакомьтесь так же:  Где можно сдать кровь на гепатит с бесплатной

Лабораторная диагностика гепатита Е (ГЕ) Этиологический агент гепатита Е (ГЕ) — это сферический вирус, лишенный внешней оболочки, это односпиральный РНК-вирус размером около 32-34 нм в диаметре. При постановке диагноза ГЕ в каждом отдельном случае необходимо принять во внимание несколько диагностических аргументов: — наличие у больного симптомокомплекса острого, и предположительно инфекционного гепатита, — надежное исключение этиологического участия вирусов ГА и ГВ, основанное на отрицательных результатах серологических тестов — анти-ВГА класса IgM и анти-НВс класса IgM, — тщательный анализ данных эпидемиологического анамнеза, включая указания на недавние выезды в эндемичные регионы, — исследование (по возможности) фекалий больного на присутствие частиц вируса ГЕ методом иммуноэлектронной микроскопии, ПЦР. Существуют диагностические методы, основанные на применении иммунофлюоресцирующих антител (МФА) для определения антигена ВГЕ в фекалиях и иммуноферментного анализа (ИФА) для определения антител к ВГЕ — анти-ВГЕ класса IgM и IgG. Наличие анти-ВГЕ класса IgM с высокой частотой определяются в сыворотках больных ГЕ в острой стадии заболевания и в период ранней реконвалесценции; выявление анти-ВГЕ класса IgG свидетельствуют о перенесенной в прошлом ГЕ — инфекции. Для диагностики ГЕ определяют также РНК ВГЕ. Отечественные фирмы производители диагностических тест-систем для выявления маркеров вирусных гепатитов:

МОСКВА и область — НИАРМЕДИК — ЭКОлаб — БИОСЕРВИС

НОВОСИБИРСК — ВЕКТОР БЕСТ — ВЕКТОР МБС ( МЕДИКОБИОЛ.СОЮЗ) — ВЕКТОР БИАЛЬГАМ

НИЖНИЙ НОВГОРОД — МИКРОГЕН (бывший ИМБИО) — ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ САНКТ-ПЕТЕРБУРГ — АВИЦЕННА — АКВАПАСТ

Методы лабораторных анализов на выявление вирусов и особенности расшифровки результатов исследования

Стоимость медицинских услуг в коммерческих лабораториях может зависеть от типа услуги, ее сложности, срочности, а также других факторов.

Получить медицинские услуги можно не только в государственных медицинских лабораториях, но и в коммерческих медицинских центрах.

Для того чтобы результаты медицинских услуг были максимально достоверными, необходима правильная подготовка.

Спецпредложения, скидки и акции помогут существенно сэкономить на медицинских услугах.

Контроль качества клинических лабораторных исследований, осуществляемый по международным стандартам, – весомый аргумент при выборе независимой лаборатории.

Многие вирусы могут очень долго присутствовать в организме и циркулировать в крови, до поры до времени не вызывая никаких неприятностей. Однако это вовсе не значит, что они безопасны. Лабораторные анализы на вирусы позволяют выявить наличие последних, даже если никаких симптомов нет.

Анализы на вирусы: какие инфекции они выявляют

Для выявления вирусов лаборатории проводят исследования крови несколькими методами. Наибольшее распространение на сегодня получили ПЦР и иммуноферментный (ИФА) анализы.

Иммуноферментный анализ крови определяет наличие антител к вирусам (или антигенов к ним) в крови — иммуноглобулины (lgA, lgG, lgM) вырабатываются при заражении вирусами и являются своеобразными маркёрами инфекции.

Анализ на ДНК вируса, или ПЦР-исследование, позволяет выявить тип инфицирующего агента.

В качестве биоматериала для исследования обычно берут кровь. Анализ крови может подтвердить гепатит, герпес и вирус Эпштейна-Барра, аденовирус, различные половые инфекции (в том числе и сифилис), вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) и другие инфекции. Однако кровь не единственный биоматериал, пригодный для выявления вирусных поражений. В зависимости от заболевания и симптомов, для анализа на вирусы сдают соскоб слизистой оболочки, кал, мочу, мазок, слюну.

Методы анализа на вирусы

Как мы уже отмечали, исследование крови на вирусы можно проводить двумя разными способами. Расскажем о них подробнее.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это новый способ выявления вирусов, основанный на принципах молекулярной биологии. ПЦР идентифицирует генетический материал «агрессора». Так можно установить и вид вируса, и, что особенно важно, количество инфицированных клеток. Для проведения анализа биоматериал, в котором могут находиться фрагменты ДНК или РНК возбудителя болезни, смешивают с особыми ферментами, создающими копию этих фрагментов. Каждая копия также создает копию, и вскоре на лабораторном стекле оказывается количество молекул, достаточное для идентификации «врага». Их анализируют и сравнивают с базой данных, чтобы выяснить тип вируса. Этот способ эффективен для выявления разных инфекций (не только вирусных) — гепатита, многих половых инфекций (уреаплазмоза, хламидиоза), микоплазмоза, ВИЧ, папилломавируса, вируса гриппа и некоторых других.

Иммуноанализ (ИФА)

Иммуноферментный метод анализа на вирусы позволяет установить форму болезни, вызванной вирусом (хроническая, острая или бессимптомная), а также оценить эффективность противовирусной терапии. Это один из самых распространенных и точных методов для выявления половых инфекций, в частности ВИЧ и ВПЧ, гепатита В.

Для анализа на вирусы чаще всего сдается кровь. Обязательно предупредите врача, если вы недавно проводили вакцинацию, — этот факт может отразиться на точности анализов. Рекомендуется не принимать пищу на протяжении 8-ми часов перед забором биоматериала, а также воздержаться от употребления алкоголя и от курения.

Время ожидания результатов зависит от типа вируса, на который проводится анализ, и от методики работы лаборатории. Обычно результаты готовы через 1–3 дня, но иногда приходится ждать и 2 недели.

Расшифровка результатов анализа на вирусы

Рассказать о том, каким образом следует трактовать результаты анализов на все виды вирусов, в рамках одной статьи невозможно. Далее мы поговорим лишь о наиболее известных заболеваниях и о часто назначаемых исследованиях.

В случае проведения анализа методом ИФА наличие IgG в крови на гепатит говорит о том, что этот вирус в организме присутствовал, но иммунная система выработала к нему антитела. Присутствие одновременно антител класса IgM и IgG говорит о заболевании в острой форме. Иммуноглобулины только класса IgM — признак первичного инфицирования.

При проведении исследования методом ПЦР определяется РНК вируса. Результаты могут быть приведены в следующем формате:

  • РНК вируса не выявлена.
  • РНК вируса выявлена в концентрации ниже предела количественного определения (менее15 МЕ/мл). Сомнительный результат.
  • РНК вируса гепатита С выявлена (от 15 и выше 100000000 МЕ/мл).

Для выявления этого вируса гепатита чаще всего назначается ИФА. Если в крови присутствуют антитела IgG и IgM, это значит, что вирус очень активен или же заражение произошло недавно.

В случае проведения ПЦР-анализа определяется концентрация фрагментов ДНК вируса гепатита В. Пациент получает результат с одной из приведенных трактовок:

  • Не обнаружено.
  • Сомнительный результат (результат положительный с концентрацией ДНК вируса гепатита В на границе точности метода).
  • Обнаружено.

Если говорить о трактовке ИФА, то наличие антител, обозначаемых как Anti-HSV-IgG, говорит не об иммунитете к вирусу, а о том, что вы уже были когда-то инфицированы. Этот маркёр наблюдается у большинства пациентов. Если показатель anti-HSV-IgG в пробах, взятых в динамике за 2-недельный период, заметно растет, это значит, что заражение произошло недавно. О рецидиве говорит высокий показатель IgG.

Папилломавирус

Для выявления этого вируса исследуется соскоб эпителиальных клеток. Наличие вируса выявляется методом идентификации его ДНК. Если в результате сказано «ДНК не обнаружено», это говорит об отсутствии вируса. Менее 3 Lg говорит о незначительной концентрации вируса, 3–5 Lg – о клинически значимой, более 5 Lg — об очень высокой.

Вирус Эпштейна-Барр

Если иммуноглобулины VGA IgM, VGA IgG, EA IgG и EBNA IgG в бланке анализа значатся как «отрицательные», вируса в организме нет. Положительный VGA IgM при отрицательном результате на остальные антитела сигнализирует о ранней стадии заражения.

Вирус иммунодефицита человека

Расшифровка анализа крови на ВИЧ очень проста — если результат отрицательный, это значит, что вирус не обнаружен, если положительный — увы, вирус в крови есть. Но следует знать, что сегодня даже самые надежные методы точны лишь на 98–99%, то есть всегда остается шанс, что результат будет, например, ложноположительным.

Аденовирус

При анализе на аденовирус, вызывающий респираторные заболевания, применяется в основном ИФА. В ходе анализа подсчитываются IgG-антитела. Если показатель менее 0,8 условных единиц — результат отрицательный, более 0,8 — положительный.

Ротавирус (в народе его называют кишечным гриппом) — острая кишечная инфекция, самый распространенный возбудитель диареи. Для анализа обычно берется образец кала. Обозначение «отрицательно» в результатах говорит о том, что следов антигенов не обнаружено, «положительно» — что состояние вызвано именно ротавирусом.

Проходить обследование на вирусы обязательно, даже если нет никаких изменений в самочувствии. Как мы уже говорили, некоторые вирусные поражения никак не проявляют себя, однако отсутствие симптомов еще не означает, что человек здоров. Яркий пример таких «тихих» вирусов — ВИЧ, который на ранних стадиях не дает никаких симптомов, оставаясь, тем не менее, смертельно опасным.

Где можно сдать анализы на выявление вирусов?

Анализ на вирусы можно сдать в любой лаборатории. Как выбрать подходящую, рассказывает эксперт сети диагностических лабораторий «ИНВИТРО»:

«Государственные поликлиники и лаборатории могут быть хорошо оснащены, однако система приема в них так неудобна, что многие люди бесконечно откладывают проверку здоровья только из нежелания тратить время на бесконечное стояние в очередях и пропускать работу из-за неудобного графика работы муниципальных медучреждений. Их можно понять, однако здоровье важнее потерянного времени!

Дилемма решается обращением в частную лабораторию. Их гораздо больше, чем муниципальных, так что рядом с вашим домом или офисом точно есть несколько подходящих. У «ИНВИТРО», например, более 800 отделений по всей стране, они расположены как в центре крупных городов, так и на окраинах, и все работают по графику, комфортному для современных занятых людей.

Исследования на многие типы вирусов требуют времени. Но если вы выбрали крупный диагностический центр, у которого есть собственный лабораторный комплекс, ожидание будет короче. У нас, например, 9 технологических комплексов: в Москве, Санкт-Петербурге, Челябинске, Новосибирске и Самаре, на территории Украины — в Днепропетровске, на территории Республики Беларусь — в Минске, на территории Казахстана — в Алматы и Астане. Это позволяет нам обрабатывать данные максимально быстро. А результат вы можете получить так, как вам удобнее — в Личном кабинете на сайте, в распечатанном виде с курьером, по электронной почте и даже по телефону — чтобы сохранить врачебную тайну, в последнем случае мы попросим вас придумать кодовое слово и сказать его оператору.»

P.S. «ИНВИТРО» — крупнейшая в нашей стране сеть независимых лабораторий, которая работает с 1995 года.

Лицензия на осуществление медицинской деятельности ЛО-77-01-015932 от 18.04.2018.